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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 考马斯亮蓝法测定蛋白质
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wmy2008diao1

铜虫 (小有名气)

[求助] 考马斯亮蓝法测定蛋白质

考马斯亮蓝的配置方法
准确称取考马斯G-250 100mg,用50ml无水乙醇溶解后，再加入100ml85%磷酸，蒸馏水定容至200ml过滤后于冰箱内保存，使用时按1：4的比例蒸馏水稀释再进行蛋白质的测定。
网上的方法有先定容到1000ml再过滤的，到底是哪种方法呢，测定的时候样液和考马斯亮蓝的配比是多少？
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1楼 2013-06-07 19:38:25
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muchong5577

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
Bradford 液配法：0.01%（w/v）考马斯亮兰G250，4.7%（w/v）乙醇，8.5%
（w/v）磷酸，使用前配好，过滤备用。
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2楼2013-06-08 09:25:12
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qianshengguo

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
2楼的回答不错。
补充一句吧，考马斯亮兰在这个溶液体系里有些难溶，一般建议需要搅拌过夜。
还有就是考马斯亮兰测蛋白浓度是很不准的，如果只是大概估算就算了，用绘标准曲线的方法得出的待测样品蛋白的浓度与实际数值相差很大，50%都很平常。
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3楼2013-06-08 09:44:49
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