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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 植物southern杂交
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肖乐allen

金虫 (初入文坛)

[求助] 植物southern杂交

大虾们，帮忙看看这是怎么回事，杂了两次了都这种情况，通道能看到到，条带只有隐隐约约的。不胜感激！
植物southern杂交
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做人简单，做事勤奋
1楼 2013-06-06 10:47:00
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-06 15:19:03
像这种情况，你这个背景也不浅了，应该不是压片时间的问题，可能一是是你的目的DNA量不够二是就是你转膜时转的不太好，转膜不充分
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2楼2013-06-06 12:04:13
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肖乐allen

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by songzuowei at 2013-06-06 12:04:13
像这种情况，你这个背景也不浅了，应该不是压片时间的问题，可能一是是你的目的DNA量不够二是就是你转膜时转的不太好，转膜不充分

DNA量应该够了，每泳道有8-10ug，转膜先用2.5个压力转了2h,用5个压力转了30min。以前这么做的，出来过较理想、较清楚的结果。
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做人简单，做事勤奋
3楼2013-06-06 13:07:12
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songzuowei

木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 肖乐allen at 2013-06-06 13:07:12
DNA量应该够了，每泳道有8-10ug，转膜先用2.5个压力转了2h,用5个压力转了30min。以前这么做的，出来过较理想、较清楚的结果。...

奥 那按理说是没问题啊 你的药品比如说地高辛抗体啊 cdp-star 没有过期吧
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肖乐allen
4楼2013-06-06 15:23:52
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肖乐allen

金虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by songzuowei at 2013-06-06 15:23:52
奥 那按理说是没问题啊 你的药品比如说地高辛抗体啊 cdp-star 没有过期吧...

抗体是地高辛的，一直放在4度，大概有一两个月吧。难道会变质？
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做人简单，做事勤奋
5楼2013-06-07 09:31:30
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songzuowei

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 肖乐allen at 2013-06-07 09:31:30
抗体是地高辛的，一直放在4度，大概有一两个月吧。难道会变质？...

一两个月肯定没事 我们的都放一年了也没事 那这个实在是搞不懂啥情况了
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6楼2013-06-07 10:05:05
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肖乐allen

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by songzuowei at 2013-06-06 15:23:52
奥 那按理说是没问题啊 你的药品比如说地高辛抗体啊 cdp-star 没有过期吧...

我在想是不是探针和抗体加的少了点，我是加的8ml,25ng/ml的探针，抗体是加的2ul.但以前是这么做的，师兄都是这么做的。
还有碱转液对转膜影响大吗？上次配的时候可能没有称量准确氢氧化钠的量。
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做人简单，做事勤奋
7楼2013-06-07 11:02:25
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肖乐allen

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by songzuowei at 2013-06-07 10:05:05
一两个月肯定没事 我们的都放一年了也没事 那这个实在是搞不懂啥情况了...

是啊，瓶子上就写着一化开就放在2-8度的。southern就是郁闷，时有时无的！
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做人简单，做事勤奋
8楼2013-06-07 11:05:24
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songzuowei

木虫 (著名写手)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-06-10 16:51:44
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7楼: Originally posted by 肖乐allen at 2013-06-07 11:02:25
我在想是不是探针和抗体加的少了点，我是加的8ml,25ng/ml的探针，抗体是加的2ul.但以前是这么做的，师兄都是这么做的。
还有碱转液对转膜影响大吗？上次配的时候可能没有称量准确氢氧化钠的量。...

这个soutern确实是不好做 做的不好我们往往是转膜出现问题 抗体的量一般是万分之一你这个探针浓度有点低啊 怎么会只有25ng/ml呢 每微升这么些都不高哇 你说的碱转液是说的是转膜时的缓冲液呢还是胶的变性液啊 转膜的缓冲液我们一般是用的10xSSC的高盐溶液
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肖乐allen
9楼2013-06-07 11:35:44
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dcb005

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-06-10 16:51:59
隐隐约约能看到条带，感觉封闭的不好，还有洗脱，造成大量背景，有条件用p32放射性试一试
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肖乐allen
★穷则独善其身,达则兼济天下★
10楼2013-06-07 16:13:04
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