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cxwu10016869

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-06-10 16:52:10
感觉背景有点高，转膜效率不高
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11楼2013-06-07 21:37:43
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肖乐allen

金虫 (初入文坛)
送红花一朵
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10楼: Originally posted by dcb005 at 2013-06-07 16:13:04
隐隐约约能看到条带，感觉封闭的不好，还有洗脱，造成大量背景，有条件用p32放射性试一试

封闭不好还真有可能，这张图用的封闭液放在4度有2周了用的。今天做另外一个southern时都发臭了，配了新的。那我把这图的膜从杂交再返工一次试试看怎么样。
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做人简单，做事勤奋
12楼2013-06-08 11:03:42
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肖乐allen

金虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by songzuowei at 2013-06-07 11:35:44
这个soutern确实是不好做 做的不好我们往往是转膜出现问题 抗体的量一般是万分之一你这个探针浓度有点低啊 怎么会只有25ng/ml呢 每微升这么些都不高哇 你说的碱转液是说的是转膜时的缓冲液呢还是胶的变性液啊 转膜 ...

探针经地高辛标记后用试剂盒纯化，浓度是50ng/ul，加到4ul（师兄说的，我一般多加个一两ul）到8ml的杂交液中42度过夜杂交的。碱转液说的转膜的时候的缓冲液，及2M的氯化钠、0.5M的氢氧化钠溶液。
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做人简单，做事勤奋
13楼2013-06-08 15:27:56
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肖乐allen

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by dcb005 at 2013-06-07 16:13:04
隐隐约约能看到条带，感觉封闭的不好，还有洗脱，造成大量背景，有条件用p32放射性试一试

有条件可以做，但不敢也不想碰放射性
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做人简单，做事勤奋
14楼2013-06-08 15:29:05
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-06-10 16:52:23
引用回帖:
13楼: Originally posted by 肖乐allen at 2013-06-08 15:27:56
探针经地高辛标记后用试剂盒纯化，浓度是50ng/ul，加到4ul（师兄说的，我一般多加个一两ul）到8ml的杂交液中42度过夜杂交的。碱转液说的转膜的时候的缓冲液，及2M的氯化钠、0.5M的氢氧化钠溶液。...

奥 那这个探针浓度是可以的 你这个碱转液的成分怎么跟我们的不一样啊
你说的这个成分怎么跟我们用的变性液成分一样哇 这个变性液是用来浸泡琼脂糖凝胶的 目的是让在琼脂糖凝胶里的基因组变性的 而转膜时的缓冲液是10xSSC 主要成分是柠檬酸钠和氯化钠混合液 是一种中性的高盐溶液
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15楼2013-06-09 13:07:09
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肖乐allen

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
15楼: Originally posted by songzuowei at 2013-06-09 13:07:09
奥 那这个探针浓度是可以的 你这个碱转液的成分怎么跟我们的不一样啊
你说的这个成分怎么跟我们用的变性液成分一样哇 这个变性液是用来浸泡琼脂糖凝胶的 目的是让在琼脂糖凝胶里的基因组变性的 而转膜时的缓冲液是 ...

厄，不知道。我们做的在转膜之前用稀盐酸浸泡跑好凝胶10分钟，用如上的碱转液转膜。转完膜后用2xSCC中和。
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做人简单，做事勤奋
16楼2013-06-09 20:40:09
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songzuowei

木虫 (著名写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 肖乐allen at 2013-06-09 20:40:09
厄，不知道。我们做的在转膜之前用稀盐酸浸泡跑好凝胶10分钟，用如上的碱转液转膜。转完膜后用2xSCC中和。...

我晓得了 我们是转膜前三部处理 包括你说的先用酸再用碱 再用中和液泡 处理完后用10xSSC做转膜液转
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17楼2013-06-10 12:31:47
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肖乐allen

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
17楼: Originally posted by songzuowei at 2013-06-10 12:31:47
我晓得了 我们是转膜前三部处理 包括你说的先用酸再用碱 再用中和液泡 处理完后用10xSSC做转膜液转...

哦，那咱用的转膜液不同。我们是照着罗氏试剂盒上的啊
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做人简单，做事勤奋
18楼2013-06-10 21:36:44
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lx2825643

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

这个泳道能看见可能是DNA质量不高，有降解。
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

肖乐allen
19楼2013-06-11 15:27:32
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肖乐allen

金虫 (初入文坛)
送红花一朵
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19楼: Originally posted by lx2825643 at 2013-06-11 15:27:32
这个泳道能看见可能是DNA质量不高，有降解。

嗯，有可能。我师兄也这么说。但有一个DNA是我最近提的，觉得不太可能降解。
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做人简单，做事勤奋
20楼2013-06-11 22:57:45
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