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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 植物southern杂交
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肖乐allen

金虫 (初入文坛)

[求助] 植物southern杂交

大虾们，帮忙看看这是怎么回事，杂了两次了都这种情况，通道能看到到，条带只有隐隐约约的。不胜感激！
植物southern杂交
图片1.png
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做人简单，做事勤奋
1楼 2013-06-06 10:47:00
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-06-10 16:52:23
引用回帖:
13楼: Originally posted by 肖乐allen at 2013-06-08 15:27:56
探针经地高辛标记后用试剂盒纯化，浓度是50ng/ul，加到4ul（师兄说的，我一般多加个一两ul）到8ml的杂交液中42度过夜杂交的。碱转液说的转膜的时候的缓冲液，及2M的氯化钠、0.5M的氢氧化钠溶液。...

奥 那这个探针浓度是可以的 你这个碱转液的成分怎么跟我们的不一样啊
你说的这个成分怎么跟我们用的变性液成分一样哇 这个变性液是用来浸泡琼脂糖凝胶的 目的是让在琼脂糖凝胶里的基因组变性的 而转膜时的缓冲液是10xSSC 主要成分是柠檬酸钠和氯化钠混合液 是一种中性的高盐溶液
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15楼2013-06-09 13:07:09
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-06 15:19:03
像这种情况，你这个背景也不浅了，应该不是压片时间的问题，可能一是是你的目的DNA量不够二是就是你转膜时转的不太好，转膜不充分
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2楼2013-06-06 12:04:13
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肖乐allen

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by songzuowei at 2013-06-06 12:04:13
像这种情况，你这个背景也不浅了，应该不是压片时间的问题，可能一是是你的目的DNA量不够二是就是你转膜时转的不太好，转膜不充分

DNA量应该够了，每泳道有8-10ug，转膜先用2.5个压力转了2h,用5个压力转了30min。以前这么做的，出来过较理想、较清楚的结果。
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做人简单，做事勤奋
3楼2013-06-06 13:07:12
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songzuowei

木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 肖乐allen at 2013-06-06 13:07:12
DNA量应该够了，每泳道有8-10ug，转膜先用2.5个压力转了2h,用5个压力转了30min。以前这么做的，出来过较理想、较清楚的结果。...

奥 那按理说是没问题啊 你的药品比如说地高辛抗体啊 cdp-star 没有过期吧
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肖乐allen
4楼2013-06-06 15:23:52
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