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[求助]
求大神帮忙“切尾”。。
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我提的是湖底泥巴里的总DNA，但是有拖带现象，，而且很严重，希望大神来帮忙。。看看是什么问题。 实验方法：1）取2g土样于7mL离心管中加入2mL裂解缓冲液（100mL of 100mM Tris-HCl［pH 8.0］，100mM EDTA［pH8.0］，1.5M NaCl）。 2）加入2g酸洗石英沙后振荡2min，再加入0.2mL SDS（20%）继续振荡5sec继而65°C温浴1h。 3）6000r离心10min，收集上清于另一新的离心管，土壤颗粒重新悬浮于2mL裂解缓冲液65°C温浴10min，6000r离心10min。混合两次离心的上清，加入一半体积的含NaCl（1.6M）的聚乙二醇（30%），室温静置2h。 4）10000r离心20min，弃上清，粗制核酸悬浮于0.4mL TE（10mM Tris-HCl, 1mM EDTA, pH8.0）。加KAc（3M）至最终浓度为0.5M，冰浴5min。 5）4°C 13000r离心30min。水相中先加入等体积的苯酚:氯仿，13000r离心10分钟，再加入等体积苯酚:氯仿:异戊醇，13000r离心10分钟。水相中加入0.6倍体积的异丙醇，室温静置2h。 5）13000r离心30min DNA沉淀，用70%乙醇13000r离心10分钟两次。沉淀重新悬浮于20μL TE溶液中。  拖带问题.png |
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lxj341401
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