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叠瓣重华木虫 (小有名气)
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[求助]
请教用紫外可见分光光度法做蛋白含量的标准曲线的问题
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 如题请教用紫外可见分光光度法做蛋白含量的标准曲线的问题，我要测的是碳酸酐酶的含量：首先我是用磷酸缓冲液配的酶溶液，用考马斯亮蓝G-250做显色，我有几个问题： 1.大家测的吸光度都在0.2-0.8之间吗，为什么我测的都不超过0.2； 2. 相关性也就是R要达到几个9才算达标呢； 3. 我只有两个比色皿，因为酶溶液比较少每次我都是用缓冲液清洗再加入下一个标准样品的这样影响不会很大吧； 4. 大家测蛋白的时候一般配制的标准溶液浓度是多少？ 感谢大家啊，课题是新手上路请多关照~这些小细节让我纠结死了，拜谢啊~ |
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jiangyaoquan
木虫 (正式写手)
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sddtc888: 金币+1, 谢谢参与，欢迎常来！ 2013-05-21 21:55:25
叠瓣重华: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢你啊回答的好详细啊，嘿嘿 ~最大吸收波长这个应该是没问题的，这个方法已经用了好多年了，非常感谢~ 2013-05-22 08:58:02
叠瓣重华: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 都给你吧。。 2013-05-24 08:24:31
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1.你要先确定你的溶液的最毒吸收波长在哪里，如果不知道查一下，要不然你不是用最大吸收波长测量的话会出现你的吸光度很低的状况，这也是你的第一个问题；吸光度在上述范围是准确的，当然在0.434是最准确，尽量在0.2-0.8之间； 2.一般0.99可信度会高点，当然越接近越好； 3.比色皿两个就行，也就是一套，如果再另外用一个就会引起误差；你测量的时候最好从低浓度开始，做完参比后润洗第一个就好，后面的可以不用润洗；像你那样做会引起误差； 4.这个我没有做过，就不发言了。 最后补充：如果我有不完善的请见谅。 |
2楼2013-05-21 19:32:24