| 查看: 6086 | 回复: 14 | ||
jiangyinshen木虫 (著名写手)
|
[求助]
siRNA转染效率 已有2人参与
|
|
请教各位大神，敝人从上海吉玛订的siRNA（A套餐），其中包括NC-FAM，于是这几天按照invitrogen的protocol做了转染，但是转染24h和48h均未观察到荧光，视野下一片漆黑，什么都没有，不知道是什么原因，百思不得其解！ 转染过程严格避光，不存在猝灭问题，我将siRNA贮存液（20umol）滴到载片上置于荧光显微镜下观察，绿色荧光非常强烈，说明试剂有效，但是我就是想不通为什么转染48h还没有一点荧光，求各路高手解答，谢谢！ 附我的转染步骤：我做的是子宫内膜间质细胞，种在6孔板，细胞均匀分布，接种24h之内细胞密度达到70%左右做的转染。（1）转染前30min按1.5ml/孔给细胞换液，放回孵箱；（2）每孔250ul无血清培养基溶解5ul siRNA，轻柔混匀，室温静置5min；（3）每孔250ul无血清培养基溶解10ul Lipofectamin2000，轻柔混匀，室温静置5min；（4）将充分溶解的siRNA和Lipofectamin2000混合，轻柔混匀，室温静置20min；（5）将上述混合物加入孔板中，完成转染。转染后6h用完全培养基换液。转染后24h、48h、72h和96h分别收取细胞沉淀，NC-FAM组在荧光显微镜下观察，检测转染效率。 [ 来自小组 生物医药家族 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
今天放榜吗？
已经有13人回复
-
filecode，4个jtjc了
已经有9人回复
-
今天基金会出结果吗？20260819
已经有8人回复
-
欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律
已经有115人回复
-
2027广东省杰青
已经有10人回复
-
朋友圈看到的
已经有8人回复
-
时间戳变了，能看出什么问题？
已经有14人回复
-
咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否
已经有30人回复
-
快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。
已经有7人回复
-
什么时候开奖？
已经有6人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 请教siRNA转染的几个问题
已经有11人回复
- SIRNA
已经有34人回复
- 几段中文翻译成英文 急求呀 拜托大家帮帮忙
已经有6人回复
- 【求助/交流】我想问下瞬时转染和稳定转染。。。
已经有8人回复
- 【分享】推荐一款性能最实用的转染试剂
已经有14人回复
chnfhjxl
金虫 (初入文坛)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 515.3
- 帖子: 48
- 在线: 115.4小时
- 虫号: 1468126
- 注册: 2011-10-30
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
2楼2013-05-17 13:30:25
jiangyinshen
木虫 (著名写手)
- 应助: 31 (小学生)
- 金币: 2207.2
- 红花: 1
- 帖子: 2442
- 在线: 128.6小时
- 虫号: 990634
- 注册: 2010-04-07
- 专业: 生殖生物学
3楼2013-05-18 19:54:23
dongxie1982
铜虫 (正式写手)
- BioEPI: 2
- 应助: 55 (初中生)
- 金币: 69.9
- 红花: 1
- 帖子: 335
- 在线: 95.9小时
- 虫号: 1514344
- 注册: 2011-11-28
- 性别: GG
- 专业: 抗肿瘤药物药理
4楼2013-05-19 11:02:58
chnfhjxl
金虫 (初入文坛)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 515.3
- 帖子: 48
- 在线: 115.4小时
- 虫号: 1468126
- 注册: 2011-10-30
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
5楼2013-05-19 12:31:24
jiangyinshen
木虫 (著名写手)
- 应助: 31 (小学生)
- 金币: 2207.2
- 红花: 1
- 帖子: 2442
- 在线: 128.6小时
- 虫号: 990634
- 注册: 2010-04-07
- 专业: 生殖生物学
6楼2013-05-20 23:36:06
dongxie1982
铜虫 (正式写手)
- BioEPI: 2
- 应助: 55 (初中生)
- 金币: 69.9
- 红花: 1
- 帖子: 335
- 在线: 95.9小时
- 虫号: 1514344
- 注册: 2011-11-28
- 性别: GG
- 专业: 抗肿瘤药物药理
7楼2013-05-22 17:12:25
jiangyinshen
木虫 (著名写手)
- 应助: 31 (小学生)
- 金币: 2207.2
- 红花: 1
- 帖子: 2442
- 在线: 128.6小时
- 虫号: 990634
- 注册: 2010-04-07
- 专业: 生殖生物学
8楼2013-05-26 13:33:39
9楼2013-07-17 20:54:27
|
1.Lipofectamin2000已经是个很古老的东西了，siRNA转染建议你用Life的RNAi MAx转染试剂，这个效率是大家公认的，关于国产的siRNA转染试剂，我不想说太多，劝大家不要去尝试，这个不是从洋媚外，差距是真实存在的； 2.Fam-NC是看转染效率的，因为fam是化学合成的荧光基团，曝光太久会淬灭的，所以保存的是棕色的管子，培养箱也要避光，必须是6小时换液的时候看，如果楼主要看看是淬灭了还是没转染进去，你可以在换液前看一下荧光，如果有荧光就证明没有淬灭，换液后荧光要是没有了那就是没转染进去呀，这个道理大家懂吧； 3.关于siRNA套装，强烈像大家推荐Transheep的siRNA套装，性价比超高，4个靶点的套装比其他公司3个的优惠，还有礼品送，大家可以去订购一下试试！ |
10楼2015-05-04 01:02:07
