应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » siRNA转染效率
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 5649  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

jiangyinshen

木虫 (著名写手)

[求助] siRNA转染效率 已有2人参与

请教各位大神，敝人从上海吉玛订的siRNA（A套餐），其中包括NC-FAM，于是这几天按照invitrogen的protocol做了转染，但是转染24h和48h均未观察到荧光，视野下一片漆黑，什么都没有，不知道是什么原因，百思不得其解！
转染过程严格避光，不存在猝灭问题，我将siRNA贮存液（20umol）滴到载片上置于荧光显微镜下观察，绿色荧光非常强烈，说明试剂有效，但是我就是想不通为什么转染48h还没有一点荧光，求各路高手解答，谢谢！

附我的转染步骤：我做的是子宫内膜间质细胞，种在6孔板，细胞均匀分布，接种24h之内细胞密度达到70%左右做的转染。（1）转染前30min按1.5ml/孔给细胞换液，放回孵箱；（2）每孔250ul无血清培养基溶解5ul siRNA，轻柔混匀，室温静置5min；（3）每孔250ul无血清培养基溶解10ul Lipofectamin2000，轻柔混匀，室温静置5min；（4）将充分溶解的siRNA和Lipofectamin2000混合，轻柔混匀，室温静置20min；（5）将上述混合物加入孔板中，完成转染。转染后6h用完全培养基换液。转染后24h、48h、72h和96h分别收取细胞沉淀，NC-FAM组在荧光显微镜下观察，检测转染效率。

[ 来自小组 生物医药家族 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
不是風動，亦非幡動，仁者心動
1楼 2013-05-15 20:42:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wyn20122065

新虫 (初入文坛)
我和你一样买的是吉玛的A套餐，请问一下这个里面的FAM标记阴性对照是干什么的？如何使用啊？谢谢了，本人新手，不太懂!
赞一下 回复此楼
9楼2013-07-17 20:54:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

chnfhjxl

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-05-18 07:44:28
jiangyinshen: 金币+2, ★有帮助 2013-05-18 19:53:33
我和你做的差不多，不过是6小时换液的时候就观察荧光，到没有等到24小时。可以看得到转进去了。要不你6小时换液的时候看看有没有荧光。有可能换液啊之内的操作的时候猝灭了。但是按道理24小时也可以看得到的。尽量减少lipo2000的剧烈操作
赞一下 回复此楼
2楼2013-05-17 13:30:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangyinshen

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chnfhjxl at 2013-05-17 13:30:25
我和你做的差不多，不过是6小时换液的时候就观察荧光，到没有等到24小时。可以看得到转进去了。要不你6小时换液的时候看看有没有荧光。有可能换液啊之内的操作的时候猝灭了。但是按道理24小时也可以看得到的。尽量减 ...

问题是我全程严格避光的啊
赞一下 回复此楼
不是風動，亦非幡動，仁者心動
3楼2013-05-18 19:54:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dongxie1982

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

转染前更换的培养液也是无抗无血清？4~6h就可以观察到了不需再更换培养液
赞一下 回复此楼
4楼2013-05-19 11:02:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化学0703-一志愿211-338分求调剂 +5 vants 2026-04-05 5/250 2026-04-05 16:40 by imissbao
[考研] 材料调剂 +10 壹贰贰亿 2026-04-04 10/500 2026-04-05 13:59 by imissbao
[考研] 复试调剂 +7 春日来信- 2026-04-03 7/350 2026-04-05 12:50 by Hdyxbekcb
[考研] 一志愿南航，数一英一学硕317求调剂！！ +5 Acaciad 2026-04-04 5/250 2026-04-05 12:31 by 搏击518
[考研] 312求调剂 +3 Say Never 2026-04-04 3/150 2026-04-05 11:19 by guoweigw
[考研] 270求调剂 +9 小杰pp 2026-03-31 11/550 2026-04-05 11:02 by 风雨无晴
[考研] 化学357分，考研调剂 +10 .Starry. 2026-04-04 11/550 2026-04-05 10:57 by cql1109
[考研] 材料调剂 +7 dxy调剂 2026-04-04 7/350 2026-04-05 09:15 by 陌秋26
[考研] 本科211 分数293请求调剂 +4 莲菜就是藕吧 2026-04-01 4/200 2026-04-04 22:32 by hemengdong
[考研] 材料科学与工程调剂 +19 深V宿舍吧 2026-03-30 20/1000 2026-04-04 22:13 by hemengdong
[考研] 材料专硕 调剂 +13 CXN123456 2026-04-03 13/650 2026-04-04 21:59 by hemengdong
[考研] 333求调剂 +9 阿科逸 2026-03-31 9/450 2026-04-04 18:25 by macy2011
[考研] 335求调剂 +7 沈清璃 2026-04-03 7/350 2026-04-03 18:55 by lijunpoly
[考研] 085600专硕材料与化工348分求调剂 +10 上学啦！ 2026-04-01 11/550 2026-04-03 14:13 by 百灵童888
[考研] 311求调剂一志愿合肥工业大学 +15 秋二十二 2026-03-30 15/750 2026-04-03 10:19 by linyelide
[考研] 312求调剂 +6 小小墨123 2026-04-02 7/350 2026-04-03 07:32 by jsw79
[考博] 申博求助 +3 Reee1Llll 2026-04-01 3/150 2026-04-02 22:29 by 这是一个无聊的�
[考研] 一志愿大工学硕，求调剂 +4 yub0811 2026-04-02 4/200 2026-04-02 21:36 by 百灵童888
[考研] 一志愿中海洋320化学工程与技术学硕求调剂 +8 披星河 2026-03-30 8/400 2026-03-31 08:53 by lbsjt
[考研] 085601一志愿西北工业大学初试346 +4 085601初试346 2026-03-30 4/200 2026-03-31 07:47 by jp9609
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭