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为啥总是提不出自然界微生物群落的总DNA
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各位大侠，小妹又来问啦~ 小妹我最近做的实验是从载体上收集尽可能多的微生物，提取这些微生物的DNA： 1） 加0.6mL TE悬浮沉淀，并加30µL10%SDS，5µL 20mg/mL蛋白酶K，强烈震荡至均匀，37℃恒温反应0.5~1h。 3) 加1.5mL5mol/LNaCl溶液，混匀。 4) 加1.5mLCTAB/NaCl溶液，混匀，65℃恒温静置20min。 5) 用等体积氯仿：异戊醇（24:1）抽提两次，轻轻缓慢混匀，8000 r/min, 25℃离心10min，将上清液移至10mL无菌离心管。 6) 加等体积异丙醇，颠倒混匀，室温下静置30min，沉淀DNA。5000r/min离心10min，倒出上层废液，用70%乙醇漂洗后，吸干，溶于适量的TE，-20℃保存，以备后续实验。 第一次我取了0.2g收集的微生物，沉淀时看到有碎碎的白色碎片，跑胶没看到DNA，第二次取了0.4g，沉淀时有白色薄膜，跑胶看到DNA但没有很亮。中间有别的实验就把提的DNA放冰箱了三天，昨天用引物338-518做RCR，25ul体系里加4ul模板，35个循环，跑胶出来只有引物二聚体！而拿我同门提的养殖场沼渣DNA做对照也P了，有短片段的条带，求问这到底是什么问题~ |
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