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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求解读此PCR 为何如此不堪入目
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渭水凡夫

铁虫 (小有名气)

[求助] 求解读此PCR 为何如此不堪入目

为什么会跑成这样啊  sample 是血浆和血清DNA  用MIX 做的PCR

2013-5-5晚PCR1.JPG



2013-5-5晚PCR2.JPG



2013-5-5晚PCR3.JPG
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平静的水和不叫的狗是最可怕的
1楼 2013-05-06 17:54:16
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的marker为什么这么暗？我觉得可能是PCR的模板量太多。
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2楼2013-05-07 02:56:03
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genolab

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
DNA质量如何？
引物是不是不太好？自己设计的还是文献中的？
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3楼2013-05-07 09:24:23
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渭水凡夫

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-07 02:56:03
你的marker为什么这么暗？我觉得可能是PCR的模板量太多。

因为是血浆中提的DNA 量很少 加了5ul
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平静的水和不叫的狗是最可怕的
4楼2013-05-07 19:19:39
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渭水凡夫

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by genolab at 2013-05-07 09:24:23
DNA质量如何？
引物是不是不太好？自己设计的还是文献中的？

前四个是以前合成能做出来的引物  后四个是按照原来的单子重新定的新引物   是自己合成的
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平静的水和不叫的狗是最可怕的
5楼2013-05-07 19:21:04
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 渭水凡夫 at 2013-05-07 19:19:39
因为是血浆中提的DNA 量很少 加了5ul...

模板定量了吗？量很少是多少？
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6楼2013-05-07 22:37:05
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渭水凡夫

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-07 22:37:05
模板定量了吗？量很少是多少？...

没有定量啊
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平静的水和不叫的狗是最可怕的
7楼2013-05-08 12:00:06
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德国工兵铲

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
模板浓度太高？
退火温度太低？

中间有比较量的是目的条带么？如果是就调整一下体系与程序。

点样孔有量，模板不够纯。
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8楼2013-05-08 14:39:08
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
特异性不高，建议增加退火温度，适当缩短延伸时间，可以增加引物GC含量值。

你的Marker是多大的，对于你的产物是不是不太合适。

模版最好定量。
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9楼2013-05-08 15:25:53
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渭水凡夫

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by reallpf at 2013-05-08 15:25:53
特异性不高，建议增加退火温度，适当缩短延伸时间，可以增加引物GC含量值。

你的Marker是多大的，对于你的产物是不是不太合适。

模版最好定量。

Mark I  退火温度是55  求指教
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平静的水和不叫的狗是最可怕的
10楼2013-05-08 23:37:27
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