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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白质在等电点下吸附分离
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董依慧

金虫 (小有名气)

苦逼女博

[求助] 蛋白质在等电点下吸附分离

为了证明蛋白质在其等电点下，在介孔材料表面的吸附量最大，所以做了蛋白质在等电点溶液中的吸附分离实验，但是在这之前需要做蛋白质在PH=等电点的缓冲溶液中的标准曲线，发现蛋白在等电点值的缓冲 溶液中溶解性很差该怎么办？实验现在进行不下去了。。求助有谁做过类似的实验吗？我现在做的蛋白是纤维素蛋白，卵清蛋白和酪蛋白。非常感谢！
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加油
1楼 2013-04-17 11:26:42
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-21 14:01:15
蛋白质在PH=等电点时当然是基本上不带静电荷，因此同种蛋白质容易在溶液中彼此碰撞的布朗运动中发生凝聚而沉淀，所以溶解度是最低的。这时吸附蛋白质用疏水层析比较好。。。。我不明白你的实验目的？
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2楼2013-04-17 11:36:55
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

根据你的实验，你可以加大溶液的疏水性，具体再讨论吧，今天我没有时间了。
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3楼2013-04-17 12:00:11
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董依慧

金虫 (小有名气)

苦逼女博
引用回帖:
2楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-04-17 11:36:55
蛋白质在PH=等电点时当然是基本上不带静电荷，因此同种蛋白质容易在溶液中彼此碰撞的布朗运动中发生凝聚而沉淀，所以溶解度是最低的。这时吸附蛋白质用疏水层析比较好。。。。我不明白你的实验目的？

我的实验是这样的，利用介孔材料吸附不同的蛋白，比较吸附量的不同，那么为了保证蛋白吸附量达到最大，就选择在其等电点值的缓冲溶液中进行吸附，然后离心测试吸光度，在这之前肯定要做这个蛋白在这个等电点值的缓冲溶液中不同浓度的吸光度，然后绘制标准曲线，现在的问题就是标准曲线无法完成，因为蛋白很难在这里面溶解，谢谢你！
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加油
4楼2013-04-17 13:01:53
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-21 14:01:33
加大蛋白质溶解度，一般可以加入表面活性剂（包括对于高度疏水性的膜蛋白都是这样溶解的，你的实验就不要用离子型的表面活性剂，比如SDS之类，那样会引起蛋白质变性，一般用非离子型的表面活性剂即可），调节溶液离子强度。看来你的实验不能调PH值，主要用加入适当的表面活性剂即可。

参见：表面活性剂化学.pdf
http://ishare.iask.sina.com.cn/f/23374478.html?from=like
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董依慧
5楼2013-04-21 12:48:19
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董依慧

金虫 (小有名气)

苦逼女博
送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-04-21 12:48:19
加大蛋白质溶解度，一般可以加入表面活性剂（包括对于高度疏水性的膜蛋白都是这样溶解的，你的实验就不要用离子型的表面活性剂，比如SDS之类，那样会引起蛋白质变性，一般用非离子型的表面活性剂即可），调节溶液离 ...

非常感谢你的回复，但是这个表面活性剂化学的链接打不开诶，我们课题组只是做材料的，想通过蛋白吸附来考察材料 的性质，所以其实我们对蛋白这一块真的不是很懂，谢谢你的帮助！加入表面活性剂对蛋白或者材料会不会有类似改性的影响呢？
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加油
6楼2013-04-23 16:50:18
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墨悱药

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我想问一下  你现在还是在用这三种蛋白质吗？貌似他们的溶解性都不是很好啊
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既然選擇了遠方，就只顧風雨兼程
7楼2013-10-23 10:11:41
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