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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 请问TEV酶怎么保存？
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shenwuyan

铁虫 (初入文坛)

[求助] 请问TEV酶怎么保存？

我表达纯化了一批tev酶，纯度和浓度都挺高的。

但是洗脱下来的tev酶在500mM咪唑中，用洗脱液稀释到OD280=2，约有40ml；
为了保存，需去咪唑，用1L如下透析液4°C透析过夜：
50 mM Tris HCl pH=7.5 plus 1 mM EDTA, 5 mM DTT

结果第二天一看，一大坨一大坨的沉淀！！！
离心后取上清测OD280，仅有0.2左右。
看到别人protocol这么写：
“Do not concentrate TEV protease too much (0.5 - 1 mg/ml)
Spin 10,000 rpm for 20 min
Take supernatant

Add glycerol for storage at -80oC. ”
我用10k的膜浓缩，堵膜，一下午几乎没有浓缩多少。

现在就很疑惑，洗脱下来  在高浓度咪唑中的tev酶该怎么处理并保存？越详细越好
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1楼 2013-04-10 14:46:58
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