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zhangjie801284

木虫 (正式写手)

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[交流] ＤＮＡ凝胶图片已有2人参与

ＤＮＡ提取过程能否满足ＰＣＲ的参考1 、CTAB提取液:分别配制2%的(W/V) CTAB,其他成分相同分别为100mmol/ L Tris-HCl(pH=8. 0)，5Ommol/L EDTA pH8.0,1400 mmol/ L NaCl。1%-疏基乙醇，2%-PVP.

2 、CTAB提取缓冲液:100 mL含2gCTAB, 10 mL 1 mol/L Tris-HCl(pH 8. 0)，0.74gEDTA, 8.18 g N aCl, 0.2 mL巯基乙醇。DNA提取液:二氯甲烷与异戊醇的体积比为24：1

3、改良后的CTAB法具体提取步骤如 ( 1)取新鲜叶片1g放入己冷冻的研钵中，加入不溶性的pvp0.2g在液氮中迅速侧h磨成粉末;然后将粉末放入含650 u高盆提取缓冲液1.5ml加入离心管中,加入80u1巯基乙醇，混匀，65℃水浴的75 min其间混匀
2- 3次，取出样品，冷却至室温;(2)加入650u1氯仿/异戊醇(24: 1), 50 u1饱和酚，震荡混匀，12000 r/min离心lOmin(3)取上清液，移至另一1.5 ml离心管中，再加入700 u 1氯仿屏戊醇( 24: 1),震荡混匀，12 000 r/min离心10 min(4)取上清液，移至另一15ml,离心管中，加入5mol/LNaC1200u1、加入600 u 1冰冻无水乙醇，充分混匀，静置，-20℃沉淀凝聚2h 10 000 r/min,离心lOmin (5)弃上清，加入75%乙醇洗涤2- 3次，最后将沉淀置于40℃烘箱中烘干，加入100ulTE buffer中溶解沉淀，待完全溶解后短暂离心。

4、提取缓冲液:100 mmol/L Tris-HCl(PH=8.0),20 mmol/L乙二胺四乙酸(EDTA)，1.4 mo1/L NaCL 质量分数20%十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)，质量分数2%巯基乙醇.DNA缓冲液:50 mmol/L Tri*-HC1(PH =8.0), 10 mmol/L EDTA.

5、行充分研磨，研磨后粉末迅速放入65℃预热的1mL2*CTAB( 2%CTAB; 1.4mol/LNaCl(pH8.0)0.02mo1/LEDTA(pH8.0.);0.lmol/LTris-HCl(PH8.0);0.06mo1/L Vitamin C; 4%琉基乙醇 (用前加))提取缓冲液中
6、
CTAB法提取液:100 mmol/lTris-HC1  (pH 8.0)1.4mol/lNaC1,20 mmol/lEDTA (pII 8.0), 2% CTAB ,2% PV P, 2%琉基乙醇。

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7、


8、提取缓冲液2*CTAB:2% CTAB,l00mM Tris-Cl(PH8.0) , 20mM EDTA(PH 8.0),1.4M NaCl，2% Na2Co3  2%PVP,3% 巯基乙醇(使用前加入)

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