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lpr01木虫 (小有名气)
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[求助]
求助 DNA 连接反应条件 E coli DNA连接酶
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求各位专家帮忙，小硕做科研已经快一年的时间了，一直卡在两段DNA的连接上面， 希望大神指点，谢谢！ 我的实验是这样的：有两端双链的DNA，他们的末端是相同的，都是G/AATTC,分别对应的是5’和3’端，5‘端修饰“P”磷酸基团，3’端修饰“OH”，现在想用E coli DNA连接酶将两端连接起来成为一条双链，但是总是做不出来，求解释。 我的反应条件是将开始两段双链DNA，混合在37度的孵化箱中互补反应1h，然后加入E coli 连接酶及其自带缓冲溶液，以及BSA，在孵化箱16度温育过夜。。。。 但是在上述的反应条件下，经验证没有连接起来，我想知道我的问题出在哪，或者有没有更好的反应条件，希望大家帮忙指点，万分感激！！！！！  |
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