应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 神奇现象！ cDNA做3‘-RACE的结果，求解释！
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 1325  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

thinkdoll

金虫 (小有名气)

[交流] 神奇现象！ cDNA做3‘-RACE的结果，求解释！

小虫第一次尝试着做RACE, 见解浅薄，请各位大侠多指教！
现象时这样的：
反转录后cDNA做3‘-RACE得到的测序结果中间存在许多终止子。
如果按第一个终止子算的话，显然基因没那么短。
并且无论拿整个蛋白序列或是终止子前的序列blast都不和我预计的蛋白同源。（每个race的结果都取了4~5个克隆测序，结果都不太相同，而且中间都存在若干终止子）

请问大家做RRACE的时候有这种状况么？
还有一般需要筛选多少个克隆才能得到目的片段呢？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2013-03-27 14:03:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

platanus

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
建议用高保真的酶扩增，我估计是你的PCR过程中错配率太高了的原因，没有测到真正的序列！
赞一下 回复此楼
6楼2013-03-29 09:10:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

gaoyang636

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
thinkdoll: 金币+2 2013-03-28 22:06:21
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-03-29 16:04:49
终止子不是大问题，一方面不一定是按照这个ORF来到，另一方面某些情况下终止子只是部分终止，并非100%地终止（细胞生物学上讲过）
你这个序列blast的结果是什么呢？同源序列是你的物种里面的么？
赞一下 回复此楼
2楼2013-03-27 15:53:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

thinkdoll

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gaoyang636 at 2013-03-27 15:53:25
终止子不是大问题，一方面不一定是按照这个ORF来到，另一方面某些情况下终止子只是部分终止，并非100%地终止（细胞生物学上讲过）
你这个序列blast的结果是什么呢？同源序列是你的物种里面的么？

谢谢你的回复！
orf就是这个没错的。我想作为不完全终止这种情况未免也太特殊了。
我做的物种很小众，基因库里没啥序列。blast得到的同源序列分值也都不高，score30~40%，identity 20~30.感觉也看不出是啥来。
赞一下 回复此楼
3楼2013-03-28 22:04:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

robustli

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
think about your polymerase, if it is Taq ploymerase, the stop codon might be  created by the Taq ploymerase
赞一下 回复此楼
4楼2013-03-28 23:47:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂推荐 材料 304 +15 荷包蛋hyj 2026-03-26 15/750 2026-03-28 04:13 by fmesaito
[考研] 331环境科学与工程求调剂 +3 熠然好运气 2026-03-27 3/150 2026-03-28 04:11 by fmesaito
[考研] 275求调剂 +10 jjjjjjjjjjl 2026-03-27 10/500 2026-03-27 23:47 by barnett0632
[考研] 085701环境工程，267求调剂 +12 minht 2026-03-26 12/600 2026-03-27 22:22 by 无际的草原
[考研] 张芳铭-中国农业大学-环境工程专硕-298 +3 手机用户 2026-03-26 3/150 2026-03-27 21:39 by lbsjt
[考研] 一志愿北京化工大学 070300 学硕 336分 求调剂 +9 vv迷 2026-03-22 9/450 2026-03-27 15:59 by 不吃魚的貓
[考研] 材料292调剂 +12 橘颂思美人 2026-03-23 12/600 2026-03-27 15:44 by caszguilin
[材料工程] 一志愿C9材料与化工专业总分300求调剂 +7 曼111 2026-03-24 8/400 2026-03-27 13:53 by 杨杨杨紫
[论文投稿] Journal of Mechanical Science and Technology +3 Russ_ss 2026-03-25 5/250 2026-03-27 10:49 by 陆小果画大饼
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-26 3/150 2026-03-27 07:58 by chemisry
[考研] 求调剂 一志愿 本科 北科大 化学 343 +6 13831862839 2026-03-24 7/350 2026-03-26 22:57 by 不吃魚的貓
[考研] 349求调剂 +4 李木子啊哈哈 2026-03-25 4/200 2026-03-26 22:49 by fmesaito
[考研] 考研调剂 +6 来好运来来来 2026-03-21 7/350 2026-03-25 22:43 by 418490947
[考研] 生物技术与工程 +3 1294608413 2026-03-25 4/200 2026-03-25 18:02 by 1294608413
[考研] 0854AI CV方向招收调剂 +4 章小鱼567 2026-03-23 4/200 2026-03-25 17:04 by CoderLoser
[考研] 293求调剂 +7 加一一九 2026-03-24 7/350 2026-03-25 12:02 by userper
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
[考研] 300分，材料，求调剂，英一数二 +5 超赞的 2026-03-24 5/250 2026-03-24 21:07 by 星空星月
[考研] 0703化学调剂，求导师收 +7 天天好运来上岸� 2026-03-24 7/350 2026-03-24 20:26 by peike
[考研] 材料考研调剂生 +3 黄粱一梦千年 2026-03-24 3/150 2026-03-24 17:00 by barlinike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭