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thinkdoll

金虫 (小有名气)

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[交流] 神奇现象！ cDNA做3‘-RACE的结果，求解释！

小虫第一次尝试着做RACE, 见解浅薄，请各位大侠多指教！
现象时这样的：
反转录后cDNA做3‘-RACE得到的测序结果中间存在许多终止子。
如果按第一个终止子算的话，显然基因没那么短。
并且无论拿整个蛋白序列或是终止子前的序列blast都不和我预计的蛋白同源。（每个race的结果都取了4~5个克隆测序，结果都不太相同，而且中间都存在若干终止子）

请问大家做RRACE的时候有这种状况么？
还有一般需要筛选多少个克隆才能得到目的片段呢？

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1楼 2013-03-27 14:03:56

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thinkdoll

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引用回帖:

2楼: Originally posted by gaoyang636 at 2013-03-27 15:53:25
终止子不是大问题，一方面不一定是按照这个ORF来到，另一方面某些情况下终止子只是部分终止，并非100%地终止（细胞生物学上讲过）
你这个序列blast的结果是什么呢？同源序列是你的物种里面的么？

谢谢你的回复！
orf就是这个没错的。我想作为不完全终止这种情况未免也太特殊了。
我做的物种很小众，基因库里没啥序列。blast得到的同源序列分值也都不高，score30~40%，identity 20~30.感觉也看不出是啥来。