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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 神奇现象！ cDNA做3‘-RACE的结果，求解释！
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thinkdoll

金虫 (小有名气)

[交流] 神奇现象！ cDNA做3‘-RACE的结果，求解释！

小虫第一次尝试着做RACE, 见解浅薄，请各位大侠多指教！
现象时这样的：
反转录后cDNA做3‘-RACE得到的测序结果中间存在许多终止子。
如果按第一个终止子算的话，显然基因没那么短。
并且无论拿整个蛋白序列或是终止子前的序列blast都不和我预计的蛋白同源。（每个race的结果都取了4~5个克隆测序，结果都不太相同，而且中间都存在若干终止子）

请问大家做RRACE的时候有这种状况么？
还有一般需要筛选多少个克隆才能得到目的片段呢？
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1楼 2013-03-27 14:03:56
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platanus

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
建议用高保真的酶扩增，我估计是你的PCR过程中错配率太高了的原因，没有测到真正的序列！
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6楼2013-03-29 09:10:13
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