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dayanxiang

木虫 (正式写手)

[求助] 细菌亲缘关系疑问

请问同一种不同菌株的16S rDNA 序列有没有可能相似性只有87%?通常情况下没有,有没有特例,比如某些功能类群,非常感谢!
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liujianmin68

木虫 (职业作家)

努力发展交叉学科

这个问题挺好,期待行家解答。
转向地质微生物学
2楼2013-03-20 08:04:31
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molecula

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhangxingc: 金币+5, 很好的应助 2013-03-20 09:20:18
dayanxiang: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-03-20 22:47:56
一般情况下,同一种,不同菌株之间的差异绝对 不会超过4%!
因为按照国际上的菌种分类学来讲,当两个菌株的16S rDNA的blast差异性超过了4%的时候,我们就可以进行生理生化测定,判定该菌株是否是新的小种。如果超过了8%的时候,基本上就可以判定两个菌株不是同一个小种。如果超过了10%,我们就会认为是其他小种,两个菌株之间的差异性横竖不可能超过4%。这个基本上是一个默认的规矩。
3楼2013-03-20 08:31:10
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lmhzy1987

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
dayanxiang: 金币+5, 有帮助, 谢谢! 2013-03-20 22:56:16
取决于你对于微生物种的定义,如果以16S为准的话一般同种不同株差异是很小的,但是如果你以功能类群,假设都是降解A的菌株,那就可能16S相差很大,简单说16S和你的功能类群二者没有直接联系,16S涉及的是一个系统发育关系。
头疼的文库
4楼2013-03-20 21:20:58
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dayanxiang

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by molecula at 2013-03-20 08:31:10
一般情况下,同一种,不同菌株之间的差异绝对 不会超过4%!
因为按照国际上的菌种分类学来讲,当两个菌株的16S rDNA的blast差异性超过了4%的时候,我们就可以进行生理生化测定,判定该菌株是否是新的小种。如果超过 ...

非常感谢!看您是专业人士,我再进一步问一下,如果我买来的菌培养之后克隆测序比对,相似性不到90%,是什么原因呢,变异?污染?请帮忙分析一下可能的原因,谢谢!
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5楼2013-03-20 22:54:57
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dayanxiang

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by lmhzy1987 at 2013-03-20 21:20:58
取决于你对于微生物种的定义,如果以16S为准的话一般同种不同株差异是很小的,但是如果你以功能类群,假设都是降解A的菌株,那就可能16S相差很大,简单说16S和你的功能类群二者没有直接联系,16S涉及的是一个系统发 ...

非常感谢您的回复,我所说的种是分类学上的,不同菌株比如Acetobacterium woodii ATCC 29683 和Acetobacterium woodii DSM 1030
我现在是从ATCC买回来一株纯菌,培养之后克隆测序NCBI比对,相似性不到90%,是什么原因,变异或污染?您提供以下可能的原因和解释吗?
谢谢!
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6楼2013-03-20 23:06:30
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tianhome

木虫 (知名作家)

16s是用于定属的,但相差这么多,如果没测错的话肯定不属于同一个属,更不要说同一个种了。原因有可能是菌名错了,或者污染了。国外的菌保中心有时也不那么靠谱。
虫洞
7楼2013-03-21 05:56:07
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lmhzy1987

金虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by dayanxiang at 2013-03-20 23:06:30
非常感谢您的回复,我所说的种是分类学上的,不同菌株比如Acetobacterium woodii ATCC 29683 和Acetobacterium woodii DSM 1030
我现在是从ATCC买回来一株纯菌,培养之后克隆测序NCBI比对,相似性不到90%,是什么 ...

我能告诉你的是,菌保中心出错也是见过的,相似性不到90%的话,你可以给他们写信反馈下。然后从第三家再要一株吧,这个事确实比较倒霉
头疼的文库
8楼2013-03-21 11:01:37
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molecula

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by dayanxiang at 2013-03-20 22:54:57
非常感谢!看您是专业人士,我再进一步问一下,如果我买来的菌培养之后克隆测序比对,相似性不到90%,是什么原因呢,变异?污染?请帮忙分析一下可能的原因,谢谢!...

变异的可能性不大。变异必须在具备变异的条件下才会发生。打个比方:当菌体暴露在紫外线下面的时候,AT碱基发生水合反应,生成水合胸腺嘧啶。CG碱基发生点突变,生成C=C或者G=G的形式的错配。如果没有诸如紫外线、γ射线、其他类型的辐射源存在,同时没有使用氯化铯、亚硝酸盐环境的右边,或者其他非常剧烈的恶劣环境的诱导,一般菌体,尤其是细菌,在冰箱的冷藏环境下,是很难发生突变反应的。

故此,我认为有两点可能:
1:你送去测序的序列。如果是你自己PCR反应后,获取的16S rDNA序列,那么,你在设计引物的时候,是直接选取了国际上 已经公布的引物序列,还是自己设计的?如果是自己设计的,那么,你的设计可能并不是严格按照保守区域设计的。如果是用的国际上公布的简并引物,那么,有可能是在测序的时候做了一个反应,造成反应不完全,你可以再次测序,这次你要求测序公司给你测通。
2:如果上述的一切步骤都没有存在疑问。那么,唯一的可能就是菌体除了问题。要么,你买菌种的地方低温冷冻干燥过程中没有试驾合理的保护剂,造成具体DNA片段丢失。要么就是,那么邮寄的时候搞错了。因为对方的菌体库往往是同一菌种、相似菌种放在同一个库里面,你问问对方给你邮寄的时候有没有搞错。
3:如果以上都没有问题,那么,就是菌体真的发生了污染现象,这种污染有可能是菌体融合或者吞噬的过程。这个可能微乎其微!除非你运气好到爆棚,这样的情况足够发一篇6以上的微生物文章了。这就是一个全新菌种了!

你检查过以上内容之后,告诉我一声原因是什么。

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9楼2013-03-21 13:38:52
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dayanxiang

木虫 (正式写手)

送鲜花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by molecula at 2013-03-21 13:38:52
变异的可能性不大。变异必须在具备变异的条件下才会发生。打个比方:当菌体暴露在紫外线下面的时候,AT碱基发生水合反应,生成水合胸腺嘧啶。CG碱基发生点突变,生成C=C或者G=G的形式的错配。如果没有诸如紫外线、 ...

非常感谢,有进展我会及时反馈

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10楼2013-03-22 00:20:44
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