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guozhi2009

铁虫 (正式写手)

[求助] 大肠杆菌扩大培养

各位的大肠杆菌是用锥形瓶培养的么,我的保存在平板培养基上的,怎么知道每次挑多少到锥形瓶呢
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lanlong3000

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
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amisking: 金币+2, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-03-18 21:46:20
amisking: 回帖置顶 2013-03-18 21:46:23
扩培怎么也应该用单菌落吧,长到一起怎么知道里面有没有有问题的,同种菌,菌落之间也可能存在差异,这种情况应该先挑一点培养后,做稀释涂平板分离或者划线,嫌麻烦也可以直接挑到无菌水里打散后分离,得到单菌落后再扩培,至于量嘛,不急可以先挑一个单菌落到装液量5ML试管或者25ML小摇瓶长6小时以上或者过夜,再接到200ML摇瓶,急的话直接挑一个单菌落接200ML摇瓶过夜也能长的差不多饱和了
7楼2013-03-18 14:53:17
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lihongyue328

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
您可以用接种环挑一下平板上的菌,然后划线到另一个平板上,划几下,接种环用酒精灯烧一烧,待接种环凉了后,再与原来的划线的部分有一些重叠再去接着往下划线,这样重复几次直到划线到平板的最下方,培养12-16小时左右,一般即可长出单菌落,再挑取单菌落于液体培养基(加相应的抗性),希望能够对您有帮助,祝实验顺利!
10楼2013-03-20 12:52:36
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jingg1990

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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大肠杆菌应该是从平板菌种做系列稀释,做出单菌落后,用单菌落接斜面或平板,培养好后,用接种铲在生长较好、较均匀的位置取长1cm左右,宽为1接种铲宽度的菌种于200ml液体培养基中。根据生长情况调整取菌种条的长度即可。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
9楼2013-03-19 10:31:53
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普通回帖

zhenwuhuang

至尊木虫 (文学泰斗)

【答案】应助回帖

★ ★
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laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助! 2013-03-18 11:28:25
不对呀,应该是筛选菌落后。挑一个菌落到锥形瓶大批量培养
2楼2013-03-18 11:17:09
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shangyukuan

银虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

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1~10个吧,要看你用多大的锥形瓶,加多少培养基了,这个最好试验下
Ian
3楼2013-03-18 11:50:54
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guozhi2009

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by shangyukuan at 2013-03-18 11:50:54
1~10个吧,要看你用多大的锥形瓶,加多少培养基了,这个最好试验下

200ml的液体培养基呢,我的大肠杆菌在平板上的菌落长在一起了,不是分散的
4楼2013-03-18 11:56:58
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guozhi2009

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhenwuhuang at 2013-03-18 11:17:09
不对呀,应该是筛选菌落后。挑一个菌落到锥形瓶大批量培养

看文献上都是调OD600=0.1
5楼2013-03-18 11:57:52
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shangyukuan

银虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by guozhi2009 at 2013-03-18 11:56:58
200ml的液体培养基呢,我的大肠杆菌在平板上的菌落长在一起了,不是分散的...

确定无杂菌就行,接进去的又不是单一菌株,200真的很多了,我们这100的话一般是挑10个到第二天早上
Ian
6楼2013-03-18 12:02:53
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wadecao

禁虫 (正式写手)

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本帖内容被屏蔽

8楼2013-03-18 21:27:17
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