应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 重组菌再次活化不表达的原因都有什么
51/1返回列表
查看: 1069  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

ice清玉

新虫 (初入文坛)

[求助] 重组菌再次活化不表达的原因都有什么

我的重组菌三个月前还能诱导出来，而且诱导的挺好，18℃，28℃，37℃三个温度，五个IPTG浓度都表达，且表达量都很多（都是在包涵体中表达）。现在把三个月前保存菌种拿出来活化再诱导，一点儿蛋白都不表达了。然后我用当时构建好保存的质粒重新转化了表达菌株，诱导还是不表达。我想不出来是哪里出了问题，求各位大神指点一二。跪谢...TAT
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-03-13 19:55:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gaojuan1985

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你用的是什么载体和什么宿主菌？我用pET系列和BL21的话，如果表达很多的话，通常都有泄漏表达，没加IPTG就表达了。你也没看到这种状况？
赞一下 回复此楼
5楼2013-03-13 20:22:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

gaojuan1985

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励应助 2013-03-13 20:25:00
匪夷所思~~碰到过以下情况，可能影响：
1.IPTG配错了。有个MM，配高了十倍，结果就悲剧了。所以，检查你所有的试剂、培养基等，确保没有错误的地方。
2.质粒被重组了。要不要再跑一下你的质粒看看完整性，以及插入片段大小是否正确？
赞一下 回复此楼
2楼2013-03-13 20:13:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ice清玉

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gaojuan1985 at 2013-03-13 20:13:50
匪夷所思~~碰到过以下情况，可能影响：
1.IPTG配错了。有个MM，配高了十倍，结果就悲剧了。所以，检查你所有的试剂、培养基等，确保没有错误的地方。
2.质粒被重组了。要不要再跑一下你的质粒看看完整性，以及插入 ...

1. IPTG是以前用过的，没有重新配。
2. 质粒用之前做了PCR，片段大小没有问题，现在送去测序了，等结果，我个人认为应该不会有什么问题。

我打算明天借别人一管IPTG再试试，难不成我的IPTG在某种我不知的情况下失去作用了？要不我实在想不出还能有什么问题了....
赞一下 回复此楼
4楼2013-03-13 20:19:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ice清玉

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gaojuan1985 at 2013-03-13 20:13:50
匪夷所思~~碰到过以下情况，可能影响：
1.IPTG配错了。有个MM，配高了十倍，结果就悲剧了。所以，检查你所有的试剂、培养基等，确保没有错误的地方。
2.质粒被重组了。要不要再跑一下你的质粒看看完整性，以及插入 ...

培养基不能出问题吧....培养基出问题，菌都摇不起来....而且期间我还借过别人的培养基用，也是一样的结果....

这样就没有什么其他的试剂了吧...就只有IPTG了...这个出问题的可能也微乎其微...
赞一下 回复此楼
6楼2013-03-13 20:24:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭