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LiJie861027新虫 (初入文坛)
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双荧光素酶报告实验
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| 双荧光素酶报告实验是怎么回事情？ |
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
LiJie861027: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-03-13 15:34:21
感谢参与，应助指数 +1
LiJie861027: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-03-13 15:34:21
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简单的说，这个实验系统可以研究基因调控，或者说启动子活性。基因何时 ON/OFF？其行使功能的效率如何？基因可以被某个药物switched ON/OFF? 这个系统里一般有两个载体，一个载体上有萤火虫荧光素酶Firefly luciferase基因，这个载体一般会连接上你想要检测的基因或者说启动子；另外一个载体上有海肾荧光素酶Renilla luciferase基因，一般这个载体上还连接有超强启动子，作为内对照基因，默认这个载体的表达水平也就是海肾荧光素酶基因的表达水平在所有细胞，或者细胞在不同的环境下，都是一样的。这个就是萤火虫荧光素酶-海肾荧光素酶双报告基因检测方法，PROMEGA和一些国产的厂家都已经有这个试剂盒。另外，现在应该还有其他的荧光素酶系统可以选择。 实验步骤大概是： 1.先加入Luciferin检测Firefly luciferase 活性(经2s延迟后读数)。 2.加入Stop&Glo终止Firefly 反应，同时开始检测Renilla luciferase 活性(经2s延迟后读数) 。 3.实验的结果以Firefly和Renilla活性的比值来衡量。 这个实验需要用可以检测化学发光的仪器来做。因为化学发光的信号比较微弱和不稳定，所以这个实验一定要做好各种对照！ |
2楼2013-03-12 20:47:11