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九公主

银虫 (小有名气)

[求助] 有关免疫组化的问题

现在正在做免疫组化看PPARγ在肝脏中的表达,做出来以后虽说有阳性表达可是阳性表达都在胞浆里,而且都是在一些空白的空泡边缘棕色比较多,但是PPARγ应该在核里表达才对,这是怎么回事呢,请大家帮帮忙看应该是怎么回事
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九公主

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by ujsyangyong at 2013-03-10 05:33:00
如果是边缘染色比较明显的话,那么有可能是非特异性的。注意以下几点可能会有帮助:
1.切片脱蜡之后进行抗原修复
2.选择正确的抗体,一抗适用的组织,以及与一抗匹配的二抗
3.对切片的进行封闭
4.每步染色操作不 ...

非常感谢你如此细心的解答,以上1、3、4、5等几点我都有做到,只是抗体是国产抗体,我今天又做了一个用等量PBS代替一抗的阴形对照,阴性对照看起来很干净没有特异性染色
相信自己
5楼2013-03-10 21:55:34
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hy_sandra

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
缩++影: 金币+2, 感谢来自台湾的朋友应助 2013-03-09 14:10:29
???M???u????paraffin?????frozen??????????????}?^????Щ????????@???????^???????antigen retrieval????????^??????????????frozon??á???о???paraformaldehyde????M???????^????????h???^4h, ??????????w?y???????????z???????w????ηN?M????human or rat or mouse, paraffin sample or frozen sample, ??????????w???????????@Щ?Y???????P???????

[ ????????? http://muchong.com/3g ]
科研是無止盡的
2楼2013-03-09 13:58:38
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ujsyangyong

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
缩++影: 金币+2, MedEPI+1, 谢谢应助 2013-03-10 11:22:51
如果是边缘染色比较明显的话,那么有可能是非特异性的。注意以下几点可能会有帮助:
1.切片脱蜡之后进行抗原修复
2.选择正确的抗体,一抗适用的组织,以及与一抗匹配的二抗
3.对切片的进行封闭
4.每步染色操作不能让切片干燥,孵育抗体时至于湿盒内。
5.显色时间不宜过长。
实验,实验,还是实验!
3楼2013-03-10 05:33:00
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ujsyangyong

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


寻梦五世: 金币+1, 应助指数+1, 感谢应助 2013-03-10 12:06:52
至于表达定位与文献报道的差异,等你确认切片为特异性染色,以及染色质量合格之后如果还是定位在胞浆,那么你很可能有了重大发现。现在发现好多原来在胞浆或者胞膜的受体可以核转位,可能是另一种信号通路。
实验,实验,还是实验!
4楼2013-03-10 05:35:17
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