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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 医学 » 基础 » 有关免疫组化的问题
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九公主

银虫 (小有名气)

[求助] 有关免疫组化的问题

现在正在做免疫组化看PPARγ在肝脏中的表达，做出来以后虽说有阳性表达可是阳性表达都在胞浆里，而且都是在一些空白的空泡边缘棕色比较多，但是PPARγ应该在核里表达才对，这是怎么回事呢，请大家帮帮忙看应该是怎么回事
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相信自己
1楼 2013-03-09 12:04:26
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回帖置顶 ( 共有1个 )

ujsyangyong

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
缩++影: 金币+2, MedEPI+1, 谢谢应助 2013-03-10 11:22:51
如果是边缘染色比较明显的话，那么有可能是非特异性的。注意以下几点可能会有帮助：
1.切片脱蜡之后进行抗原修复
2.选择正确的抗体，一抗适用的组织，以及与一抗匹配的二抗
3.对切片的进行封闭
4.每步染色操作不能让切片干燥，孵育抗体时至于湿盒内。
5.显色时间不宜过长。
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实验，实验，还是实验！
3楼2013-03-10 05:33:00
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普通回帖

hy_sandra

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
缩++影: 金币+2, 感谢来自台湾的朋友应助 2013-03-09 14:10:29
???M???u????paraffin?????frozen??????????????}?^????Щ????????@???????^???????antigen retrieval????????^??????????????frozon??á???о???paraformaldehyde????M???????^????????h???^4h, ??????????w?y???????????z???????w????ηN?M????human or rat or mouse, paraffin sample or frozen sample, ??????????w???????????@Щ?Y???????P???????

[ ????????? http://muchong.com/3g ]
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科研是無止盡的
2楼2013-03-09 13:58:38
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ujsyangyong

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
寻梦五世: 金币+1, 应助指数+1, 感谢应助 2013-03-10 12:06:52
至于表达定位与文献报道的差异，等你确认切片为特异性染色，以及染色质量合格之后如果还是定位在胞浆，那么你很可能有了重大发现。现在发现好多原来在胞浆或者胞膜的受体可以核转位，可能是另一种信号通路。
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实验，实验，还是实验！
4楼2013-03-10 05:35:17
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九公主

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ujsyangyong at 2013-03-10 05:33:00
如果是边缘染色比较明显的话，那么有可能是非特异性的。注意以下几点可能会有帮助：
1.切片脱蜡之后进行抗原修复
2.选择正确的抗体，一抗适用的组织，以及与一抗匹配的二抗
3.对切片的进行封闭
4.每步染色操作不 ...

非常感谢你如此细心的解答，以上1、3、4、5等几点我都有做到，只是抗体是国产抗体，我今天又做了一个用等量PBS代替一抗的阴形对照，阴性对照看起来很干净没有特异性染色
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相信自己
5楼2013-03-10 21:55:34
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