应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 从基因文库中筛选到目的基因后的分析
51/1返回列表
查看: 1972  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

hraikeyan

金虫 (小有名气)

[求助] 从基因文库中筛选到目的基因后的分析

各位虫友：本人前段时间从构建好的基因文库中通过功能筛选，筛选到了一株阳性克隆。接着对 测序结果在NCBI中比对，没有能和测出的结果比对上的。因此不知道这段序列编码的是什么酶。
接着把测出的序列用Vector NTI进行ORF分析，如果 将正向测序结果输入（以M13+向开始）显示整个序列被分成很多个ORF,并且最大ORF也只不过500bp，我想这应该不足以编码我的目标蛋白（酰胺酶，实验室克隆出的相同功能的酰胺酶700多bp）；如果将反向的测序结果输入（以M13-向开始）显示大致可以分俩个阅读框，一个1600bp左右，一个有700bp左右。
对于这样的结果我不知道该怎么分析，怎么设计引物克隆出目标编码基因？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
nothing isimpossible
1楼 2013-03-03 22:26:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dmzha

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hraikeyan: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-03-06 09:05:19
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-17 09:57:53
你都知道序列怎么会克隆不出目标编码基因呢？在分析的ORF（个人认为应该是反向测序结果）两端设计引物就行了，然后在大肠杆菌中表达，得到的可溶性蛋白再进行酶学性质鉴定。如果在NCBI中没有比对上，估计是新基因的可能性比较大。PS：就算是新基因，在NCBI数据库中多少还是有同源性不是很高的基因存在。
赞一下 回复此楼
5楼2013-03-04 21:34:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

qqxs

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天 2013-04-17 09:57:41
先把1600和700的两段分别在大肠杆菌里表达呗，有表型就行，不行的话在把正向的ORF分成两部分在大肠里表达，逐渐减小筛选范围。我想没有捷径。
赞一下 回复此楼
4楼2013-03-04 17:47:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hraikeyan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by dmzha at 2013-03-04 21:34:07
你都知道序列怎么会克隆不出目标编码基因呢？在分析的ORF（个人认为应该是反向测序结果）两端设计引物就行了，然后在大肠杆菌中表达，得到的可溶性蛋白再进行酶学性质鉴定。如果在NCBI中没有比对上，估计是新基因的 ...

您好，您的意思是我应该按照反向的测序结果设计引物，就是把M13-附近的设计成上游引物，把另一端设计为下游引物。
赞一下 回复此楼
nothing isimpossible
6楼2013-03-06 09:05:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dmzha

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by hraikeyan at 2013-03-06 09:05:08
您好，您的意思是我应该按照反向的测序结果设计引物，就是把M13-附近的设计成上游引物，把另一端设计为下游引物。...

根据反向序列，在ORF两端设计引物。
赞一下 回复此楼
7楼2013-03-07 10:40:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 294求调剂材料与化工专硕 +5 陌の森林 2026-03-18 5/250 2026-03-18 22:18 by bingxueer79
[考研] 328求调剂，英语六级551，有科研经历 +3 生物工程调剂 2026-03-16 10/500 2026-03-18 20:41 by Wangjingyue
[考研] 271材料工程求调剂 +4 .6lL 2026-03-18 4/200 2026-03-18 20:05 by 楤哥
[考研] 0703化学调剂 +7 妮妮ninicgb 2026-03-15 11/550 2026-03-18 19:48 by macy2011
[教师之家] 焦虑 +8 水冰月月野兔 2026-03-13 12/600 2026-03-18 15:27 by 咪呜喵呜
[考研] 299求调剂 +5 △小透明* 2026-03-17 5/250 2026-03-18 11:49 by 尽舜尧1
[考研] 278求调剂 +5 烟火先于春 2026-03-17 5/250 2026-03-18 08:43 by 星空星月
[考研] 332求调剂 +6 Zz版 2026-03-13 6/300 2026-03-17 17:03 by ruiyingmiao
[考研] 290求调剂 +3 p asserby. 2026-03-15 4/200 2026-03-17 16:35 by wangkm
[考研] 考研调剂 +3 淇ya_~ 2026-03-17 5/250 2026-03-17 09:25 by Winj1e
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
[考研] 304求调剂 +4 ahbd 2026-03-14 4/200 2026-03-16 16:48 by 我的船我的海
[考研] 0703化学调剂 290分有科研经历，论文在投 +7 腻腻gk 2026-03-14 7/350 2026-03-16 10:12 by houyaoxu
[考研] 0856求调剂 +3 刘梦微 2026-03-15 3/150 2026-03-16 10:00 by houyaoxu
[考研] 求材料调剂 085600英一数二总分302 前三科235 精通机器学习 一志愿哈工大 +4 林yaxin 2026-03-12 4/200 2026-03-13 22:04 by 星空星月
[硕博家园] 085600 260分求调剂 +3 天空还下雨么 2026-03-13 5/250 2026-03-13 18:46 by 天空还下雨么
[考研] 材料专硕350 求调剂 +4 王金科 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:02 by ruiyingmiao
[考研] 求调剂 +3 程雨杭 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:06 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:30 by 求调剂zz
[考研] 0817化学工程与技术考研312分调剂 +3 T123 tt 2026-03-12 3/150 2026-03-13 10:49 by houyaoxu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭