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zhejiahuo1

铁虫 (小有名气)

[求助] 着急啊,大家帮我看看这几个图,谢谢啦!

大家好,最近做巢式PCR遇到些问题,想请教下大家。
图1:前六道是第二轮的产物,分别代表PCR时不同的模板浓度,后四道是第一轮的产物。疑问:前六道是什么原因造成从点样孔开始拖尾?后四道又是怎么解释?
图2:第1,3,4,5道均是第二轮产物,为什么3,4,5道不光拖尾,点样孔还是亮的?
图3:前四道均是点样孔亮?为什么呢?
拜托各位大侠了,帮帮找找原因吧!

图1.jpg



图2.jpg



图3.jpg
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forever909

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
点样孔发亮的原因可能是污染了,然后那个拖尾,应该不是拖尾的,我当初也出现那样的情况,我一直以为是拖尾呢,然后就尝试各种办法解决,换了酶(mix),降低退火温度等,都是没办法的,后来我就换了引物,结果什么问题都解决了,所以我认为还是引物的问题,要么是引物降解了,要么是引物不和规则,个人意见,仅供参考
快乐是最重要的。。。。。。
2楼2013-01-26 12:38:36
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cxt86

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
图1 2nd产物的电泳图应该是引物错配太多造成的吧。建议优化条件,减少错配。可以试试提高退火温度,稀释一下1st产物模板,使用合适的延伸时间。
图2和图3 点样孔发亮如果不是制胶的问题,那就是污染了。再跑块胶看看吧。。。连Loading buffer一起换了试试
3楼2013-01-27 04:06:21
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