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zhejiahuo1

铁虫 (小有名气)

[求助] 着急啊，大家帮我看看这几个图，谢谢啦！

大家好，最近做巢式PCR遇到些问题，想请教下大家。
图1：前六道是第二轮的产物，分别代表PCR时不同的模板浓度，后四道是第一轮的产物。疑问：前六道是什么原因造成从点样孔开始拖尾？后四道又是怎么解释？
图2：第1，3，4,5道均是第二轮产物，为什么3,4,5道不光拖尾，点样孔还是亮的？
图3：前四道均是点样孔亮？为什么呢？
拜托各位大侠了，帮帮找找原因吧！

图1.jpg



图2.jpg



图3.jpg
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1楼 2013-01-26 11:49:46
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forever909

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
点样孔发亮的原因可能是污染了，然后那个拖尾，应该不是拖尾的，我当初也出现那样的情况，我一直以为是拖尾呢，然后就尝试各种办法解决，换了酶（mix），降低退火温度等，都是没办法的，后来我就换了引物，结果什么问题都解决了，所以我认为还是引物的问题，要么是引物降解了，要么是引物不和规则，个人意见，仅供参考
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快乐是最重要的。。。。。。
2楼2013-01-26 12:38:36
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cxt86

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
图1 2nd产物的电泳图应该是引物错配太多造成的吧。建议优化条件，减少错配。可以试试提高退火温度，稀释一下1st产物模板，使用合适的延伸时间。
图2和图3 点样孔发亮如果不是制胶的问题，那就是污染了。再跑块胶看看吧。。。连Loading buffer一起换了试试
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3楼2013-01-27 04:06:21
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