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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Xho I 和Not I双酶切后电泳出现严重拖尾
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liurz

金虫 (正式写手)

[求助] Xho I 和Not I双酶切后电泳出现严重拖尾

Xho I 和Not I双酶切后电泳出现严重拖尾，如图分别是酶切前后图片。请分析一下原因谢谢。酶切体系为20ul，其中两内切酶各1ul，酶为NEB公司产品。

酶切前.jpg



酶切后.jpg

[ Last edited by liurz on 2013-1-24 at 22:38 ]
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1楼 2013-01-24 22:35:16
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XOooZzz

银虫 (小有名气)
酶切不完全。酶切完全时，片段之间的亮度比例应该与片段的大小成正比。
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2楼2013-01-25 08:22:49
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
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liurz: 金币+1, ★有帮助 2013-01-25 14:31:11
感觉是酶切体系中质粒用量太大。你的质粒看起来浓度不错，20ul酶切体系里面你放了多少ug质粒？
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3楼2013-01-25 08:34:07
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yesali

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liurz: 金币+1, ★有帮助 2013-01-25 14:31:22
质粒的量过多，适当减少质粒
另外酶切体系可适当增大到40ul
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4楼2013-01-25 08:55:25
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platanus

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liurz: 金币+1, ★有帮助 2013-01-25 14:31:33
质粒的量加得太多了！
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5楼2013-01-25 11:50:39
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l_dot

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liurz: 金币+1, ★有帮助 2013-01-25 14:31:42
酶切体系为20ul， 质粒不要超过1微克
先测下质粒浓度再加
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6楼2013-01-25 12:48:16
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liurz

金虫 (正式写手)
liurz: 回帖置顶 2013-01-25 14:16:17
抱歉，补充一下，酶切体是50ul，昨天写错了。
酶切体系50ul，Xho I 和Not I各1ul（可以酶切2ug DNA），NEBbuffer 3加了5ul，纯化后目的基因30ul（三PCR管一起纯化得到），100×BSA 0.5ul，剩余无菌水补足50ul。37℃水浴4小时。或许有目的基因量太大的缘故，但是第一次实验同样体系DNA量很少，也有拖尾现象。两幅图分别是酶切前后电泳图。
另外，本人实验室无DNA浓度测定仪，都是估计的，请各位帮助估计下我的DNA浓度吧
酶切前最亮的带为100ng，请问我的DNA是不是700ng左右呢？
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7楼2013-01-25 13:34:35
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)

蓝博士

【答案】应助回帖

★
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liurz: 金币+1, ★有帮助 2013-01-25 14:31:53
是的，质粒用量确实有点太大。
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蓝精灵
8楼2013-01-25 13:55:18
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liurz

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by mlanqiang at 2013-01-25 13:55:18
是的，质粒用量确实有点太大。

能估计下我的DNA浓度吗？
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9楼2013-01-25 14:15:44
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zhoupeng87

版主 (文学泰斗)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
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liurz: 金币+1, ★有帮助 2013-01-25 14:32:03
质粒的量太多了，少一点额
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10楼2013-01-25 14:19:55
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