应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Xho I 和Not I双酶切后电泳出现严重拖尾
251/3返回列表123下一页
查看: 2969  |  回复: 24
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

liurz

金虫 (正式写手)

[求助] Xho I 和Not I双酶切后电泳出现严重拖尾

Xho I 和Not I双酶切后电泳出现严重拖尾，如图分别是酶切前后图片。请分析一下原因谢谢。酶切体系为20ul，其中两内切酶各1ul，酶为NEB公司产品。

酶切前.jpg



酶切后.jpg

[ Last edited by liurz on 2013-1-24 at 22:38 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-01-24 22:35:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

XOooZzz

银虫 (小有名气)
酶切不完全。酶切完全时，片段之间的亮度比例应该与片段的大小成正比。
赞一下 回复此楼
2楼2013-01-25 08:22:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liurz: 金币+1, ★有帮助 2013-01-25 14:31:11
感觉是酶切体系中质粒用量太大。你的质粒看起来浓度不错，20ul酶切体系里面你放了多少ug质粒？
赞一下 回复此楼
3楼2013-01-25 08:34:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yesali

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liurz: 金币+1, ★有帮助 2013-01-25 14:31:22
质粒的量过多，适当减少质粒
另外酶切体系可适当增大到40ul
赞一下 回复此楼
4楼2013-01-25 08:55:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

platanus

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liurz: 金币+1, ★有帮助 2013-01-25 14:31:33
质粒的量加得太多了！
赞一下 回复此楼
5楼2013-01-25 11:50:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

l_dot

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liurz: 金币+1, ★有帮助 2013-01-25 14:31:42
酶切体系为20ul， 质粒不要超过1微克
先测下质粒浓度再加
赞一下 回复此楼
6楼2013-01-25 12:48:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liurz

金虫 (正式写手)
liurz: 回帖置顶 2013-01-25 14:16:17
抱歉，补充一下，酶切体是50ul，昨天写错了。
酶切体系50ul，Xho I 和Not I各1ul（可以酶切2ug DNA），NEBbuffer 3加了5ul，纯化后目的基因30ul（三PCR管一起纯化得到），100×BSA 0.5ul，剩余无菌水补足50ul。37℃水浴4小时。或许有目的基因量太大的缘故，但是第一次实验同样体系DNA量很少，也有拖尾现象。两幅图分别是酶切前后电泳图。
另外，本人实验室无DNA浓度测定仪，都是估计的，请各位帮助估计下我的DNA浓度吧
酶切前最亮的带为100ng，请问我的DNA是不是700ng左右呢？
赞一下 回复此楼
7楼2013-01-25 13:34:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)

蓝博士

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liurz: 金币+1, ★有帮助 2013-01-25 14:31:53
是的，质粒用量确实有点太大。
赞一下 回复此楼
蓝精灵
8楼2013-01-25 13:55:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liurz

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by mlanqiang at 2013-01-25 13:55:18
是的，质粒用量确实有点太大。

能估计下我的DNA浓度吗？
赞一下 回复此楼
9楼2013-01-25 14:15:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhoupeng87

版主 (文学泰斗)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liurz: 金币+1, ★有帮助 2013-01-25 14:32:03
质粒的量太多了，少一点额
赞一下 回复此楼
10楼2013-01-25 14:19:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 liurz 的主题更新
251/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600材料与化工调剂 +7 A-哆啦Z梦 2026-03-23 12/600 2026-03-23 23:16 by 星空星月
[考研] 291求调剂 +8 hhhhxn.. 2026-03-23 8/400 2026-03-23 23:15 by peike
[考研] 一志愿211 初试270分 求调剂 +4 谷雨上岸 2026-03-23 5/250 2026-03-23 21:18 by 不惑可乐
[考研] 08工学调剂 +7 用户573181 2026-03-20 11/550 2026-03-23 15:47 by 我爱学习学习使�
[考研] 328求调剂 +4 LHHL66 2026-03-23 4/200 2026-03-23 14:55 by lbsjt
[考研] 070300，一志愿北航320求调剂 +3 Jerry0216 2026-03-22 5/250 2026-03-23 09:16 by 。。堂堂
[考研] 考研调剂 +4 来好运来来来 2026-03-21 4/200 2026-03-22 12:15 by 星空星月
[考研] 0856材料专硕353求调剂 +4 NIFFFfff 2026-03-20 4/200 2026-03-22 09:49 by 2026paper
[考研] 085600材料与化工306 +4 z1z2z3879 2026-03-21 4/200 2026-03-21 23:44 by ms629
[考研] 297求调剂 +11 戏精丹丹丹 2026-03-17 12/600 2026-03-21 17:47 by ColorlessPI
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-18 3/150 2026-03-21 17:31 by ColorlessPI
[考研] 299求调剂 +5 shxchem 2026-03-20 7/350 2026-03-21 17:09 by ColorlessPI
[考研] 332求调剂 +3 凤凰院丁真 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:27 by luoyongfeng
[考研] 085700资源与环境308求调剂 +12 墨墨漠 2026-03-18 13/650 2026-03-21 01:42 by JourneyLucky
[考研] 一志愿武理材料305分求调剂 +6 想上岸的鲤鱼 2026-03-18 7/350 2026-03-21 01:03 by JourneyLucky
[考研] 294求调剂材料与化工专硕 +15 陌の森林 2026-03-18 15/750 2026-03-20 23:28 by JourneyLucky
[考研] 求调剂一志愿南京航空航天大学289分 +3 @taotao 2026-03-19 3/150 2026-03-20 21:34 by JourneyLucky
[考研] 320求调剂0856 +3 不想起名字112 2026-03-19 3/150 2026-03-19 22:53 by 学员8dgXkO
[考研] 材料考研调剂 +3 xwt。 2026-03-19 3/150 2026-03-19 11:22 by w沐阳w
[考研] 0703化学调剂 +3 妮妮ninicgb 2026-03-17 3/150 2026-03-18 10:29 by macy2011
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭