应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Xho I 和Not I双酶切后电泳出现严重拖尾
251/3返回列表123下一页
查看: 2991  |  回复: 24
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

liurz

金虫 (正式写手)

[求助] Xho I 和Not I双酶切后电泳出现严重拖尾

Xho I 和Not I双酶切后电泳出现严重拖尾，如图分别是酶切前后图片。请分析一下原因谢谢。酶切体系为20ul，其中两内切酶各1ul，酶为NEB公司产品。

酶切前.jpg



酶切后.jpg

[ Last edited by liurz on 2013-1-24 at 22:38 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-01-24 22:35:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

XOooZzz

银虫 (小有名气)
酶切不完全。酶切完全时，片段之间的亮度比例应该与片段的大小成正比。
赞一下 回复此楼
2楼2013-01-25 08:22:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liurz: 金币+1, ★有帮助 2013-01-25 14:31:11
感觉是酶切体系中质粒用量太大。你的质粒看起来浓度不错，20ul酶切体系里面你放了多少ug质粒？
赞一下 回复此楼
3楼2013-01-25 08:34:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yesali

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liurz: 金币+1, ★有帮助 2013-01-25 14:31:22
质粒的量过多，适当减少质粒
另外酶切体系可适当增大到40ul
赞一下 回复此楼
4楼2013-01-25 08:55:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

platanus

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liurz: 金币+1, ★有帮助 2013-01-25 14:31:33
质粒的量加得太多了！
赞一下 回复此楼
5楼2013-01-25 11:50:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

l_dot

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liurz: 金币+1, ★有帮助 2013-01-25 14:31:42
酶切体系为20ul， 质粒不要超过1微克
先测下质粒浓度再加
赞一下 回复此楼
6楼2013-01-25 12:48:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liurz

金虫 (正式写手)
liurz: 回帖置顶 2013-01-25 14:16:17
抱歉，补充一下，酶切体是50ul，昨天写错了。
酶切体系50ul，Xho I 和Not I各1ul（可以酶切2ug DNA），NEBbuffer 3加了5ul，纯化后目的基因30ul（三PCR管一起纯化得到），100×BSA 0.5ul，剩余无菌水补足50ul。37℃水浴4小时。或许有目的基因量太大的缘故，但是第一次实验同样体系DNA量很少，也有拖尾现象。两幅图分别是酶切前后电泳图。
另外，本人实验室无DNA浓度测定仪，都是估计的，请各位帮助估计下我的DNA浓度吧
酶切前最亮的带为100ng，请问我的DNA是不是700ng左右呢？
赞一下 回复此楼
7楼2013-01-25 13:34:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)

蓝博士

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liurz: 金币+1, ★有帮助 2013-01-25 14:31:53
是的，质粒用量确实有点太大。
赞一下 回复此楼
蓝精灵
8楼2013-01-25 13:55:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liurz

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by mlanqiang at 2013-01-25 13:55:18
是的，质粒用量确实有点太大。

能估计下我的DNA浓度吗？
赞一下 回复此楼
9楼2013-01-25 14:15:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhoupeng87

版主 (文学泰斗)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liurz: 金币+1, ★有帮助 2013-01-25 14:32:03
质粒的量太多了，少一点额
赞一下 回复此楼
10楼2013-01-25 14:19:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 liurz 的主题更新
251/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 284求调剂 +3 junqihahaha 2026-03-26 3/150 2026-03-26 10:07 by zyc晨晨晨
[考研] 一志愿天津大学339材料与化工求调剂 +3 江往卖鱼 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:42 by 王小欠i
[考研] 北科281学硕材料求调剂 +14 tcxiaoxx 2026-03-20 16/800 2026-03-25 23:14 by peike
[考研] 332求调剂 +6 032500 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:45 by 418490947
[考研] 机械学硕总分317求调剂！！！！ +4 Acaciad 2026-03-25 4/200 2026-03-25 19:59 by hanserlol
[考研] 333求调剂 +6 87639 2026-03-21 11/550 2026-03-25 16:17 by 87639
[考研] 271求调剂 +4 生如夏花… 2026-03-22 4/200 2026-03-25 11:25 by userper
[考研] 318求调剂 +3 plum李子 2026-03-23 3/150 2026-03-25 09:42 by 雾散后相遇lc
[考研] 0703化学调剂，求导师收 +7 天天好运来上岸� 2026-03-24 7/350 2026-03-24 20:26 by peike
[考研] 化工专硕求调剂 +3 question挽风 2026-03-24 3/150 2026-03-24 18:48 by jhhcooi
[考研] 300求调剂，材料科学英一数二 +5 leaflight 2026-03-24 5/250 2026-03-24 16:25 by laoshidan
[考研] 307求调剂 +5 超级伊昂大王 2026-03-24 5/250 2026-03-24 15:46 by 星空星月
[考研] 生物学一志愿985，分数349求调剂 +6 zxts12 2026-03-21 9/450 2026-03-23 18:37 by macy2011
[考研] 350求调剂 +6 weudhdk 2026-03-19 6/300 2026-03-23 15:47 by tangyuan0840221
[考研] 280分求调剂 一志愿085802 +4 PUMPT 2026-03-22 7/350 2026-03-22 22:13 by 星空星月
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:09 by 星空星月
[考研] 085600材料与化工306 +4 z1z2z3879 2026-03-21 4/200 2026-03-21 23:44 by ms629
[考研] 求调剂 +4 要好好无聊 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:57 by 学员8dgXkO
[考研] 279求调剂 +5 红衣隐官 2026-03-21 5/250 2026-03-21 14:59 by lature00
[考研] 0856调剂，是学校就去 +8 sllhht 2026-03-19 9/450 2026-03-20 14:25 by 无懈可击111
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭