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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 生物制药 » NI柱上咪唑洗脱问题
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grape114

金虫 (正式写手)

[交流] NI柱上咪唑洗脱问题

Binding buffer 中含有20mmol咪唑，这个咪唑和NI结合吗？Elution 后如何去除咪唑，保留NI在柱上？把上面的咪唑再换成重组蛋白命运一样吗？
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1楼 2013-01-07 15:04:53
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dylanxue

金虫 (小有名气)
★ ★
grape114(金币+1): 谢谢参与
xiaoxiao270: 金币+1 2013-02-23 14:10:52
做亲和层析还是相对不难的，常做分离纯化啊？
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3楼2013-02-23 13:06:15
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grape114

金虫 (正式写手)
我想通了，关键一点咪唑和目的蛋白之间是竞争性洗脱，谁的竞争力强谁就和NI结合，不用管平衡液中低浓度咪唑和NI的结合，目的蛋白一上来都要让位。高浓度咪唑洗脱目的蛋白后，只需要用其他不含咪唑或者低浓度咪唑的buffer冲洗柱子，就可以降低柱上咪唑浓度，所以不用担心下次上样问题。
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2楼2013-01-07 15:40:08
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grape114

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by dylanxue at 2013-02-23 13:06:15
做亲和层析还是相对不难的，常做分离纯化啊？

还需要多多学习，刚入行
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4楼2013-02-24 13:38:24
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dylanxue

金虫 (小有名气)
都是做这一行的，常交流啊
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5楼2013-02-24 20:58:34
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