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miraclechu

金虫 (小有名气)

[求助] 有关脂肪酸甲酯化的问题 已有2人参与

最近在做细菌脂肪酸的提取和测定,需要将脂肪酸甲酯化后跑GC-MS,查阅了相关的文献,发现用的最多的是Morrison and Smith(1964)的方法,即三氟化硼甲醇溶液甲酯化,文献中有这么一段话
Boron fluoride-methanol reagent was added under nitrogen, in the proportions 1 ml reagent per 4-16 mg of lipid, and the tube was closed with the screw cap. The tube was then heated in a boiling water bath for the requisite time, cooled, and opened. The esters were extracted by adding 2 volumes of pentane, then 1 volume of water, shaking briefly, and centrifuging until both layers were clear.
三氟化硼不是和水剧烈反应么,这里加水会不会和三氟化硼反应啊

还有就是这篇文献就是将三氟化硼甲醇溶液加到脂肪酸里拧上盖子100摄氏度水浴2min就可以,这和国标用冷凝管回流什么的简化了不少,能达到良好的甲酯化效果么,我看到有的文献还有在瓶子里拧上盖子100度水浴40min的 = =

第一次做相关的实验完全没经验啊,大神们求解答啊,谢谢谢谢
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RachelJan❤||祖国尚未统一,别和哥谈爱情......
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suiweiwei

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我是甲酯化之后用正己烷萃取的,然后再旋蒸浓缩。我觉得应该不加水吧,加的话也应该加稀的氯化钠水溶液,可以使其更有效的分层,但一般我们甲酯化之后是不加的。我做的GC也能把细菌的测出来。可能方法不一样吧,我用的是二氯甲烷-甲醇提取的,你开始用什么提取的?
己所不欲,勿施于人
5楼2012-12-28 09:32:26
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普通回帖

suiweiwei

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这个是不用加水的,我做的是从微藻里提取脂肪酸,甲酯化就是直接加的三氟化硼甲醇溶液,100度反应了2小时,用GC测的很好
己所不欲,勿施于人
2楼2012-12-27 16:00:04
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suiweiwei

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励交流! 2012-12-28 20:47:46
可以多加一些甲醇,在加热反应的时候密封性不太好保持,我做的时候一般会再多加点甲醇,三氟化硼甲醇溶液比较贵,甲醇便宜,一般是加的1:1
己所不欲,勿施于人
3楼2012-12-27 16:02:04
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miraclechu

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by suiweiwei at 2012-12-27 16:00:04
这个是不用加水的,我做的是从微藻里提取脂肪酸,甲酯化就是直接加的三氟化硼甲醇溶液,100度反应了2小时,用GC测的很好

你看我给的那段文献中说的是甲酯话之后萃取产物时先加戊烷再加水,你萃取甲酯话产物用什么啊,还有你就直接将物质加入反应的小瓶中拧上盖子放在水浴里么
RachelJan❤||祖国尚未统一,别和哥谈爱情......
4楼2012-12-27 18:56:55
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miraclechu

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by suiweiwei at 2012-12-28 09:32:26
我是甲酯化之后用正己烷萃取的,然后再旋蒸浓缩。我觉得应该不加水吧,加的话也应该加稀的氯化钠水溶液,可以使其更有效的分层,但一般我们甲酯化之后是不加的。我做的GC也能把细菌的测出来。可能方法不一样吧,我用 ...

我还没具体做,准备用Bligh and Dyer (1959)的方法,也就是用三氯甲烷-甲醇-水提取,也看到有用二氯甲烷-甲醇-水提取的,区别就在用二氯甲烷还是三氯甲烷,脂肪酸在三氯甲烷中溶解度大些还是在二氯甲烷中溶解度大些呢
RachelJan❤||祖国尚未统一,别和哥谈爱情......
6楼2012-12-28 11:05:03
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把心冰封

木虫 (著名写手)

7楼2013-03-28 10:45:52
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蔡倩

新虫 (初入文坛)

我想问下楼主问题解决没,你萃取的试剂量有多少啊,如果很少量的的话你是怎么萃取的呀,我是量太少,1ML,萃取时比较难操作啊
8楼2013-06-05 16:34:54
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lvbolantao

木虫 (著名写手)

想请教下,您在甲酯化是用的容器是什么,带旋盖塑料离心管可以吗
活在当下
9楼2014-06-24 23:22:57
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快乐咖啡2013

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

楼主,你做出来了吗?我最近正在做呢,出来的GC图谱不理想,能详细说一下您的方案吗?不胜感激!
虽千万人,吾亦往矣!
10楼2014-12-20 09:54:24
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