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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 【求助】关于羟基脂肪酸的气相色谱分析
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安静的位置i

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助】关于羟基脂肪酸的气相色谱分析 已有4人参与

最近要检测羟基脂肪酸，看文献是要进行硅烷化衍生，订购了一种硅烷化试剂N,O-bis-(trimethylsilyl)-trifluoroacetamide（BSTFA），可是查不到衍生化的反应条件，还有气相检测此类物质用什么类型的色谱柱比较好？（我们目前的柱子是DB-WAXE）请高人指点！
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1楼 2010-10-06 15:01:49
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

oxygen7341

木虫 (小有名气)
安静的位置i(金币+12): 2010-10-09 22:25:50
本来，你的化合物是含有羧基的，用极性柱比较好，但是由于极性越大，柱子的耐温也就越低，通常用的WAX住，最高使用温度只有260度，常规使用只到220~240度，再往上升温，就会导致柱流失很严重。
hp-5是一款弱极性柱子，相对而言可以耐高温一点，使用280~290度是一点事情没有的，对于弱极性柱子做极性化合物，有时候会有峰型不好，拖尾等不利因素，但是为了更高温度，用弱极性要合算一点。对于极性的物质，可能柱容量会低一点，建议少进一点，如8mgml,分流比40:1。如果峰低了，再调着看，行不行，也是要试了才知道。
硅烷化试剂对于链上的羟基和羧基都能衍生了，但是效果怎么样，还要看衍生出来的图谱。
TEA,是三乙胺的简写，在这个衍生反应里面起到吸收反应生成的HCl，从而加快反应速度的。
过滤主要是过滤衍生出来的盐，由于里面是有机溶剂，所以过滤膜要用尼龙过滤膜（即有机溶剂过滤膜），一些衍生的盐会析出，要是把这些盐进到GC里面，堵在进样口还好，要是进了柱子，你柱子就要割一大截。
你好像是0.32口径的柱子，这个口径的柱子，一般流速1~3ml/min，太大了，柱子流失会加重，但是偶尔使用没有多大关系，加快样品的流出速度，除了加流速，提高起始温度是一个很好的选择。
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15楼2010-10-09 19:50:20
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finnigan

金虫 (正式写手)

PhD攻城狮
★
pplover(金币+1):感谢回复... 2010-10-07 11:25:00
安静的位置i(金币+2): 2010-10-07 13:38:44
很简单，加进去BSTFA，放置1小时即可，弱极性柱都行
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FTICRMS+Orbitrap+timsTOF+GCMSMS+EA＋石油环境化学
2楼2010-10-06 22:36:54
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oxygen7341

木虫 (小有名气)
★ ★
pplover(金币+2):感谢仔细回复1,并分享自己的经验... 2010-10-07 11:24:42
安静的位置i(金币+5): 2010-10-07 13:38:55
你有DB-WAX的柱子，可以先试试啊，只要脂肪链不是很长，DBwax应该是可以做的，你进样口设240度，柱子终温设250度，这样只要到了柱子里面，就能出来了
还有，以前我们做过bstfa，用是吡啶做溶剂，20mg/ml,加入两个当量的BSTFA,做的时候不爽，是因为吡啶味道很臭，做这类衍生，我喜欢在乙腈或者二氯甲烷里面，然后添加一点三乙胺，衍生过后，在弱极性柱子上面好点，上面的反应时间，要自己来看的，需要衍生几次，才知道具体衍生要多久，需不需要加热等。

[ Last edited by oxygen7341 on 2010-10-7 at 09:26 ]
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3楼2010-10-07 09:21:41
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oxygen7341

木虫 (小有名气)
你要是甲酯化了后，就能起到降低沸点作用了，不需要再继续用BSTFA衍生了。你衍生这个化合物，也许酰氯和三甲基氯硅烷效果也是不错的，衍生的速度很快。你的基线漂移可能是由于你的程序升温引起的，没有关系，倒是的峰高太低，而且峰比较宽，你可以从150度起始，保持2min，以20度/min到240，保持15min，流速可以2.5ml/min
要是你做蓖麻油酸，要是你有hp-5柱，可以直接在那个柱子上走，不需要衍生，走走看，应该是可以出来的，终温保持时间长点，流速快点。
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7楼2010-10-07 21:51:51
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oxygen7341

木虫 (小有名气)
衍生的目的在这里是为了降低化合物的沸点，这个化合物的沸点高，是由于里面含有羧基，导致化合物以氢键形式存在了，衍生了这个羧基就好了，通常衍生羧基就是成酯，或者硅烷化了，具体的，要是你周围有懂有机化学的，可以问问他们，这个衍生应该如何衍生。
我给你一个我以前衍生羟基的方法：
样品：取一个10ml的试管，加入4ml乙腈，50ul 的样品，400ulTEA,200ul的硅烷化试剂（TMSCl），静置15min，取过滤液进GC
空白：取一个10ml的试管，加入4ml乙腈，400ulTEA,200ul的硅烷化试剂（TMSCl），静置15min，取过滤液进GC，注意空白的衍生时间要和样品的一致，不然空白基线会对的不好，你说的那些杂质也许都是空白里面带入的，再说了，就算买的标准品，也许也会有杂质的，要相信自己的结果，要是我们自己都不相信我们自己，谈何让别人相信我们的值呢，你说是吧
关于你说的基线，你的基线单位是uV,这个单位是很小的，通常以mV计，你这个也就2mV了，这个漂移来说，还是很小的，还有你的峰宽大约是1min，在GC里面这个算比较宽的了，特别是峰高只有20mV,我看你这个图，是感觉保留太靠后了，你把提前一下，看峰型可能改善
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10楼2010-10-08 19:04:01
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oxygen7341

木虫 (小有名气)
这个化合物溶点是5度左右，在GC里面应该是可以做的，能不衍生尽量不衍生，因为衍生是有很多意想不到的情况，要考虑反应的转化率，还有考虑，是不是能把里面的杂质也能衍生了，否则，这个方法检测准确度就不好
通常衍生，只是针对某一个化合物的，不是针对里面所有化合物的，常见的是，增加一个基团，来提高化合物的检测灵敏度，或者增加保留，改善峰型，衍生掉一个影响色谱保留的基团，或者是使合物更加稳定，做GC话，就是降低沸点，提高热稳定，提高响应。
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11楼2010-10-08 19:15:23
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安静的位置i

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by oxygen7341 at 2010-10-09 19:50:20:
本来，你的化合物是含有羧基的，用极性柱比较好，但是由于极性越大，柱子的耐温也就越低，通常用的WAX住，最高使用温度只有260度，常规使用只到220~240度，再往上升温，就会导致柱流失很严重。
hp-5是一款弱极性 ...

非常清晰明了，太感谢了！
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16楼2010-10-09 22:25:41
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安静的位置i

金虫 (小有名气)
我昨天尝试做了次检测，具体衍生化步骤是这样的：先是蓖麻油酸用400微升甲醇加30微升重氮甲烷甲酯化（室温15min），之后正己烷萃取，再加入BSTFA50微升，75℃ 45min，气相检测。
色谱柱型号：DB-WAXE（30m×0.32mm×0.25μm），程序升温：190℃，3min;（3℃/min）至240℃，20min; 检测器温度：270℃，柱前压：96.526kpa， 检测器FID，分流进样，分流比：8.0。
气相结果见下图：
总体描述就是基线在检测几分钟后开始飘，而且越飘越高，峰型较宽。
基线飘得严重如何解决？峰型宽是否说明物质不纯，没有分开？我这样的衍生化及气相条件是否合适？
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4楼2010-10-07 13:53:30
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安静的位置i

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by oxygen7341 at 2010-10-07 09:21:41:
你有DB-WAX的柱子，可以先试试啊，只要脂肪链不是很长，DBwax应该是可以做的，你进样口设240度，柱子终温设250度，这样只要到了柱子里面，就能出来了
还有，以前我们做过bstfa，用是吡啶做溶剂，20mg/ml,加入两个 ...

DB wax是强极性柱，检测这个是不是会降低柱效呢？bstfa在正己烷中反应可以吗？
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5楼2010-10-07 13:56:10
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安静的位置i

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by finnigan at 2010-10-06 22:36:54:
很简单，加进去BSTFA，放置1小时即可，弱极性柱都行

那用BSTFA衍生，是不是就不需要用在之前进行甲酯化了？但是我做下来，直接BSTFA衍生的没有先甲酯化再硅烷化的效果好，直接BSTFA衍生后出峰很小。不过这两种尝试效果都不满意，基线飘得厉害。
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6楼2010-10-07 13:59:26
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安静的位置i

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by oxygen7341 at 2010-10-07 21:51:51:
你要是甲酯化了后，就能起到降低沸点作用了，不需要再继续用BSTFA衍生了。你衍生这个化合物，也许酰氯和三甲基氯硅烷效果也是不错的，衍生的速度很快。你的基线漂移可能是由于你的程序升温引起的，没有关系，倒是 ...

我单纯甲酯化效果不好，峰出不来，应该是羟基脂肪酸的羟基没有被衍生吧，看文献都要用硅烷化试剂衍生这类羟基脂肪酸，不过衍生化的条件没有具体写清楚，如果用硅烷化试剂衍生，是不是就不需要用重氮甲烷甲酯化了呢？
现在的气相图已经调整到UV×10000，也就是基线要飘到差不多2000多的位置，如果UV×1000，图中的基线就飞上天了，这个峰面积差不多是三十七万，就如您所说峰很宽，而且前面有许多峰面积几千到一万的杂峰，我的样品是买来的蓖麻油酸纯品，应该没有杂峰才对啊，如何解决这几个问题啊？
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8楼2010-10-08 08:54:34
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fantianwan

银虫 (正式写手)
★
安静的位置i(金币+1):谢谢参与
帮顶
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9楼2010-10-08 09:07:30
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