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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 相同条件下，taq酶可以PCR出条带，而Primer star却不能
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bolix

铁虫 (正式写手)

[求助] 相同条件下，taq酶可以PCR出条带，而Primer star却不能

我正在从细菌基因组里扩增目的基因
起初用的taq酶，扩增出来很亮，但结果测序错了一个碱基
后来转用TAKARA的Primer star
相同条件下却扩增不出来了
降低退火温度到49度还是不行（Taq酶用的是55度）
请教大家，是什么原因？
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1楼 2012-12-20 12:47:25
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
肯定是taq酶效率高，多选几个，会有正确的吧
也可以用Platinum® Taq DNA Polymerase High Fidelity试试
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2楼2012-12-20 13:08:54
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不同的DNA聚合酶有不同的最适引物浓度和模板浓度。你可以参考一下说明书的建议。
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3楼2012-12-20 14:30:46
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
也正常的，Taq酶保真性差，但是扩增效果好；而Primer star保真性好，但效果不一定比Taq酶好。换扩增效果同Taq酶差不多的Taq-plus试试，或者你自己做个Taq-plus，Taq里面加点Pfu或者Primer star。
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4楼2012-12-20 14:49:07
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bolix

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lxj341401 at 2012-12-20 14:49:07
也正常的，Taq酶保真性差，但是扩增效果好；而Primer star保真性好，但效果不一定比Taq酶好。换扩增效果同Taq酶差不多的Taq-plus试试，或者你自己做个Taq-plus，Taq里面加点Pfu或者Primer star。

谢谢。我就是用的天根的Taq plus，但仍然错了一个碱基。
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5楼2012-12-20 15:14:27
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
扩增片段多长呢？有一个还算好，多挑几个测序可能会有不突变的。而且，即使发生突变，但是没有影响编码的氨基酸也没关系。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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6楼2012-12-20 16:21:07
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hxswdl

至尊木虫 (文坛精英)

Tortoise

文献杰出贡献
prime star的pcr程序跟taq差别挺大的啊，另适当提高下退火温度到引物的Tm值试试！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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Dripping Concentrated!!energetic and active！
7楼2012-12-20 16:46:53
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huoyongting

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
taq酶的扩增效率高，单保真度低，一般高保真的酶扩增效率都比较低
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8楼2012-12-20 17:05:44
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bolix

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by zhaodahe at 2012-12-20 16:21:07
扩增片段多长呢？有一个还算好，多挑几个测序可能会有不突变的。而且，即使发生突变，但是没有影响编码的氨基酸也没关系。

1500bp
编码氨基酸已经变了
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9楼2012-12-24 09:49:47
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bolix

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by hxswdl at 2012-12-20 16:46:53
prime star的pcr程序跟taq差别挺大的啊，另适当提高下退火温度到引物的Tm值试试！

我试试
我一直考虑降低退火温度
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10楼2012-12-24 09:50:17
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