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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于Pet28a载体构建的质粒，蛋白表达量低是怎么回事。请大家帮忙
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枫叶留殇

新虫 (正式写手)

[求助] 关于Pet28a载体构建的质粒，蛋白表达量低是怎么回事。请大家帮忙

以Pet28a为载体构建了两个蛋白的质粒，酶切位点是Nde1 和Sal 1，连接好的质粒分别送去测序，也都对着了。但是小量诱导表达时，其中一个表达量很低，有什么办法可以提高表达量呢？我的IPTG梯度分别是0.2mM ,0.4mM ,0.6mM．Marker左边和右边分别代表不同的蛋白。请大家指教。谢谢

SUMO1SUMO2小量诱导表达.png
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在冲往未来的道路上，我会全力以赴~~~
1楼 2012-12-19 12:50:11
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ducktk

金虫 (初入文坛)
你应该摸索一下表达条件，包括IPTG浓度，还有表达时间，摇菌时间，加IPTG的时间。右边那个表达量低的，你可以尝试在表达几个小时之后补加IPTG. 祝你成功！
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8楼2012-12-23 10:39:24
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
枫叶留殇: 金币+2 2012-12-20 18:25:24
你跑的全蛋白还是可溶蛋白？会不会令一个到包涵体里面去了？此外，不同蛋白的最优诱导条件（温度、时间、IPTG浓度）都不同。你可能需要摸索优化诱导条件。
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2楼2012-12-20 09:34:27
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westerli

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
密码子优化过了没？
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3楼2012-12-20 12:01:44
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枫叶留殇

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-20 09:34:27
你跑的全蛋白还是可溶蛋白？会不会令一个到包涵体里面去了？此外，不同蛋白的最优诱导条件（温度、时间、IPTG浓度）都不同。你可能需要摸索优化诱导条件。

那marker右边的有摸索条件的必要吗？需不需要换载体？图上的胶都是菌体，还没有破菌。只是看一下下是否能够表达而已。
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在冲往未来的道路上，我会全力以赴~~~
4楼2012-12-20 18:27:15
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