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枫叶留殇

新虫 (正式写手)

[求助] 关于Pet28a载体构建的质粒,蛋白表达量低是怎么回事。请大家帮忙

以Pet28a为载体构建了两个蛋白的质粒,酶切位点是Nde1 和Sal 1,连接好的质粒分别送去测序,也都对着了。但是小量诱导表达时,其中一个表达量很低,有什么办法可以提高表达量呢?我的IPTG梯度分别是0.2mM ,0.4mM ,0.6mM.Marker左边和右边分别代表不同的蛋白。请大家指教。谢谢

SUMO1SUMO2小量诱导表达.png
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在冲往未来的道路上,我会全力以赴~~~
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westerli

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
密码子优化过了没?
3楼2012-12-20 12:01:44
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
枫叶留殇: 金币+2 2012-12-20 18:25:24
你跑的全蛋白还是可溶蛋白?会不会令一个到包涵体里面去了?此外,不同蛋白的最优诱导条件(温度、时间、IPTG浓度)都不同。你可能需要摸索优化诱导条件。
2楼2012-12-20 09:34:27
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枫叶留殇

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-20 09:34:27
你跑的全蛋白还是可溶蛋白?会不会令一个到包涵体里面去了?此外,不同蛋白的最优诱导条件(温度、时间、IPTG浓度)都不同。你可能需要摸索优化诱导条件。

那marker右边的有摸索条件的必要吗?需不需要换载体?图上的胶都是菌体,还没有破菌。只是看一下下是否能够表达而已。
在冲往未来的道路上,我会全力以赴~~~
4楼2012-12-20 18:27:15
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枫叶留殇

新虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by westerli at 2012-12-20 12:01:44
密码子优化过了没?

实验室里之前的是GST 标签,但是挂柱子的效果不好,所以换到PET里了。和稀有密码字的影响不大吧?那如果有影响的话,该怎么优化呢?
在冲往未来的道路上,我会全力以赴~~~
5楼2012-12-20 18:29:19
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