应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于Pet28a载体构建的质粒，蛋白表达量低是怎么回事。请大家帮忙
51/1返回列表
查看: 3499  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

枫叶留殇

新虫 (正式写手)

[求助] 关于Pet28a载体构建的质粒，蛋白表达量低是怎么回事。请大家帮忙

以Pet28a为载体构建了两个蛋白的质粒，酶切位点是Nde1 和Sal 1，连接好的质粒分别送去测序，也都对着了。但是小量诱导表达时，其中一个表达量很低，有什么办法可以提高表达量呢？我的IPTG梯度分别是0.2mM ,0.4mM ,0.6mM．Marker左边和右边分别代表不同的蛋白。请大家指教。谢谢

SUMO1SUMO2小量诱导表达.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
在冲往未来的道路上，我会全力以赴~~~
1楼 2012-12-19 12:50:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

枫叶留殇

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-20 09:34:27
你跑的全蛋白还是可溶蛋白？会不会令一个到包涵体里面去了？此外，不同蛋白的最优诱导条件（温度、时间、IPTG浓度）都不同。你可能需要摸索优化诱导条件。

那marker右边的有摸索条件的必要吗？需不需要换载体？图上的胶都是菌体，还没有破菌。只是看一下下是否能够表达而已。
赞一下 回复此楼
在冲往未来的道路上，我会全力以赴~~~
4楼2012-12-20 18:27:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
枫叶留殇: 金币+2 2012-12-20 18:25:24
你跑的全蛋白还是可溶蛋白？会不会令一个到包涵体里面去了？此外，不同蛋白的最优诱导条件（温度、时间、IPTG浓度）都不同。你可能需要摸索优化诱导条件。
赞一下 回复此楼
2楼2012-12-20 09:34:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

westerli

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
密码子优化过了没？
赞一下 回复此楼
3楼2012-12-20 12:01:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

枫叶留殇

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by westerli at 2012-12-20 12:01:44
密码子优化过了没？

实验室里之前的是GST 标签，但是挂柱子的效果不好，所以换到PET里了。和稀有密码字的影响不大吧？那如果有影响的话，该怎么优化呢？
赞一下 回复此楼
在冲往未来的道路上，我会全力以赴~~~
5楼2012-12-20 18:29:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 3/150 2026-11-11 18:18 by TgvkbZZl9tqB
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 4/200 2026-11-11 17:44 by TgvkbZZl9tqB
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 YHiw1gou1Eda 2026-11-10 4/200 2026-11-11 17:33 by TgvkbZZl9tqB
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 7/350 2026-11-11 17:20 by TgvkbZZl9tqB
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 FChKX8meu1ds 2026-11-09 6/300 2026-11-11 17:09 by TgvkbZZl9tqB
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 8/400 2026-11-11 17:00 by TgvkbZZl9tqB
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 6/300 2026-11-11 16:47 by TgvkbZZl9tqB
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 7/350 2026-11-11 16:41 by TgvkbZZl9tqB
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 4/200 2026-11-11 15:24 by TgvkbZZl9tqB
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 4/200 2026-11-11 14:24 by cdqGD6ftHmbl
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 FChKX8meu1ds 2026-11-09 5/250 2026-11-11 14:02 by cdqGD6ftHmbl
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 5/250 2026-11-11 13:56 by cdqGD6ftHmbl
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +6 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 8/400 2026-11-11 13:39 by cdqGD6ftHmbl
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 7/350 2026-11-11 13:31 by cdqGD6ftHmbl
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 5/250 2026-11-11 10:46 by 1Nb0IVlmV6v0
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 6/300 2026-11-11 10:13 by 1Nb0IVlmV6v0
[考博] 27博士申请 +3 白白白ly 2026-11-09 3/150 2026-11-09 21:39 by szq0819
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 12/600 2026-11-09 06:32 by l48hFd8Nwae2
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 8/400 2026-11-09 00:14 by l48hFd8Nwae2
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:12 by 5sJFDKp2kwuI
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭