应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于Pet28a载体构建的质粒，蛋白表达量低是怎么回事。请大家帮忙
91/1返回列表
查看: 3277  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

枫叶留殇

新虫 (正式写手)

[求助] 关于Pet28a载体构建的质粒，蛋白表达量低是怎么回事。请大家帮忙

以Pet28a为载体构建了两个蛋白的质粒，酶切位点是Nde1 和Sal 1，连接好的质粒分别送去测序，也都对着了。但是小量诱导表达时，其中一个表达量很低，有什么办法可以提高表达量呢？我的IPTG梯度分别是0.2mM ,0.4mM ,0.6mM．Marker左边和右边分别代表不同的蛋白。请大家指教。谢谢

SUMO1SUMO2小量诱导表达.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
在冲往未来的道路上，我会全力以赴~~~
1楼 2012-12-19 12:50:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
枫叶留殇: 金币+2 2012-12-20 18:25:24
你跑的全蛋白还是可溶蛋白？会不会令一个到包涵体里面去了？此外，不同蛋白的最优诱导条件（温度、时间、IPTG浓度）都不同。你可能需要摸索优化诱导条件。
赞一下 回复此楼
2楼2012-12-20 09:34:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

westerli

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
密码子优化过了没？
赞一下 回复此楼
3楼2012-12-20 12:01:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

枫叶留殇

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-20 09:34:27
你跑的全蛋白还是可溶蛋白？会不会令一个到包涵体里面去了？此外，不同蛋白的最优诱导条件（温度、时间、IPTG浓度）都不同。你可能需要摸索优化诱导条件。

那marker右边的有摸索条件的必要吗？需不需要换载体？图上的胶都是菌体，还没有破菌。只是看一下下是否能够表达而已。
赞一下 回复此楼
在冲往未来的道路上，我会全力以赴~~~
4楼2012-12-20 18:27:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

枫叶留殇

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by westerli at 2012-12-20 12:01:44
密码子优化过了没？

实验室里之前的是GST 标签，但是挂柱子的效果不好，所以换到PET里了。和稀有密码字的影响不大吧？那如果有影响的话，该怎么优化呢？
赞一下 回复此楼
在冲往未来的道路上，我会全力以赴~~~
5楼2012-12-20 18:29:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 枫叶留殇 at 2012-12-20 18:27:15
那marker右边的有摸索条件的必要吗？需不需要换载体？图上的胶都是菌体，还没有破菌。只是看一下下是否能够表达而已。...

marker右边的那个只能说在你用诱导的条件下诱导不好，你可以试试增加IPTG浓度，延长诱导时间什么的。
赞一下 回复此楼
6楼2012-12-21 07:47:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 枫叶留殇 at 2012-12-20 18:29:19
实验室里之前的是GST 标签，但是挂柱子的效果不好，所以换到PET里了。和稀有密码字的影响不大吧？那如果有影响的话，该怎么优化呢？...

如果稀有密码子多的话需要优化碱基序列，替换掉稀有密码子。
赞一下 回复此楼
7楼2012-12-21 07:52:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ducktk

金虫 (初入文坛)
你应该摸索一下表达条件，包括IPTG浓度，还有表达时间，摇菌时间，加IPTG的时间。右边那个表达量低的，你可以尝试在表达几个小时之后补加IPTG. 祝你成功！
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2012-12-23 10:39:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

枫叶留殇

新虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by ducktk at 2012-12-23 10:39:24
你应该摸索一下表达条件，包括IPTG浓度，还有表达时间，摇菌时间，加IPTG的时间。右边那个表达量低的，你可以尝试在表达几个小时之后补加IPTG. 祝你成功！

好的，谢谢
回复此楼
在冲往未来的道路上，我会全力以赴~~~
9楼2012-12-26 09:39:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 枫叶留殇 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +36 医学老男孩 2026-08-13 85/4250 2026-08-17 21:23 by lcmdlut
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +4 基诺咪客 2026-08-17 4/200 2026-08-17 16:10 by Vivilian
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +12 Ldrop2023 2026-08-13 15/750 2026-08-17 15:02 by 小豌豆_发芽
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭