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porphybaby金虫 (正式写手)
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如何做 Western blot 以及RT-PCR 的加药处理时间梯度？细胞数量如何统一？
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最近一直纠结一个问题。 我用Hela细胞如何做Western blot的时间梯度？ 现在我一直都是铺培养皿之后细胞贴壁后加药处理72h。然后裂细胞提蛋白，做的是加药浓度梯度。 一直想做时间梯度。但不知怎么做。 本身是想同时铺培养皿，然后加药后6h，24h，48h，72h分别拿去裂解提蛋白。再一起做WB。但又想到一个问题——关于“平摊到每个细胞上的药物量”的问题。 之前做浓度梯度，加药的时候细胞数量是一样的。72h之后它们大致也会长到80%~90%。 不过我之前铺的都很稀。 那如果是这样，岂不是我6h、24h 那些 细胞那么少，怎么跟48h 72h的比呢？ 我怎么才能控制到24h，48h，72h时间点我收细胞的时候，细胞数量大体一样？ 还是说，这个其实不影响结果? |
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