应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » western blot 细胞裂解时间
81/1返回列表
查看: 2547  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

gigiloveu

铜虫 (小有名气)

[交流] western blot 细胞裂解时间 已有5人参与

提取细胞总蛋白，每毫升RIPA中加2微升的PMSF，冰上裂解5分钟，然后12000转低温离心30分钟。
这种方法提取出来的蛋白含量很低。
请问，是不是裂解时间太短了？
还有，我们是检测细胞凋亡的有关蛋白，请问收集加药组细胞（贴壁）的时候，是否需要收集培养液中的的死细胞？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-12-04 23:25:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gigiloveu

铜虫 (小有名气)
自己顶一个
回复此楼
2楼2011-12-05 09:32:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bigbangrex

铁杆木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
我们都是冰上裂解30分钟的啊，效果不错。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-12-05 09:50:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linyingjia

至尊木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
lstt09nk(金币+2): 鼓励交流 2011-12-06 12:22:28
ripa  加pmsf  
冰上裂解小于1h   每15min混匀一次

检测凋亡相关的要把所有细胞都收集了
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2011-12-05 09:52:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gigiloveu

铜虫 (小有名气)
爽，我一直在怀疑冰上裂解5分钟时间有点短，所以导致最终提出的蛋白量有点低。谢谢各位大侠。
赞一下 回复此楼
5楼2011-12-05 11:11:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xhjggl

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
1楼: Originally posted by gigiloveu at 2011-12-04 23:25:07:
提取细胞总蛋白，每毫升RIPA中加2微升的PMSF，冰上裂解5分钟，然后12000转低温离心30分钟。
这种方法提取出来的蛋白含量很低。
请问，是不是裂解时间太短了？
还有，我们是检测细胞凋亡的有关蛋白，请问收集加 ...

可以使用全蛋白提取试剂盒 BSP005阿，效率挺高的
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-12-05 22:51:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pershing123

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我是冰上裂解30min，每5min混匀一次
赞一下 回复此楼
7楼2013-10-05 18:23:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

DAX1

新虫 (小有名气)
不知道你的RIPA是否含有SDS，如果有SDS的话会有点粘稠，基本可以将全部细胞刮下来，然后超声下就可以。基本不会损失蛋白。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2013-10-05 18:57:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 gigiloveu 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 305分求调剂（食品工程） +5 Sxy112 2026-03-21 7/350 2026-03-24 12:27 by 544594351
[考研] 一志愿山东大学药学学硕求调剂 +3 开开心心没烦恼 2026-03-23 4/200 2026-03-24 00:06 by 开开心心没烦恼
[考研] 一志愿国科过程所081700，274求调剂 +3 三水研0水立方 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:11 by MajorWen
[考研] 工科0856求调剂 +5 沐析汀汀 2026-03-21 5/250 2026-03-23 17:56 by 海瑟薇-
[考研] 一志愿南京理工大学085701资源与环境302分求调剂 +5 葵梓卫队 2026-03-18 7/350 2026-03-23 16:26 by lingjue
[考研] 317求调剂 +12 申子申申 2026-03-19 18/900 2026-03-22 22:23 by luoyongfeng
[考研] 一志愿西安交通大学材料工程专业 282分求调剂 +11 枫桥ZL 2026-03-18 13/650 2026-03-22 20:26 by edmund7
[考研] 307求调剂 +11 冷笙123 2026-03-17 11/550 2026-03-22 20:16 by edmund7
[考研] 材料与化工085600，总分304，本科有两篇sci参与，求调剂 +4 幸运的酱酱 2026-03-22 5/250 2026-03-22 20:15 by edmund7
[考研] 315分，诚求调剂，材料与化工085600 +3 13756423260 2026-03-22 3/150 2026-03-22 20:11 by edmund7
[考研] 287求调剂 +8 晨昏线与星海 2026-03-19 9/450 2026-03-22 17:01 by i_cooler
[考研] 一志愿中南化学（0703）总分337求调剂 +9 niko- 2026-03-19 10/500 2026-03-22 16:08 by ColorlessPI
[考研] 考研调剂 +4 来好运来来来 2026-03-21 4/200 2026-03-22 12:15 by 星空星月
[考博] 招收博士1-2人 +3 QGZDSYS 2026-03-18 4/200 2026-03-22 10:25 by QGZDSYS
[考研] 286分人工智能专业请求调剂愿意跨考！ +4 lemonzzn 2026-03-17 8/400 2026-03-21 22:49 by lemonzzn
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-18 3/150 2026-03-21 17:31 by ColorlessPI
[考研] 279求调剂 +5 红衣隐官 2026-03-21 5/250 2026-03-21 14:59 by lature00
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境专硕，总分308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:39 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南交通 专硕 材料355 本科双非 求调剂 +5 西南交通专材355 2026-03-19 5/250 2026-03-20 21:10 by JourneyLucky
[考研] 收复试调剂生 +4 雨后秋荷 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:16 by elevennnne
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭