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gigiloveu

铜虫 (小有名气)

[交流] western blot 细胞裂解时间 已有5人参与

提取细胞总蛋白,每毫升RIPA中加2微升的PMSF,冰上裂解5分钟,然后12000转低温离心30分钟。
这种方法提取出来的蛋白含量很低。
请问,是不是裂解时间太短了?
还有,我们是检测细胞凋亡的有关蛋白,请问收集加药组细胞(贴壁)的时候,是否需要收集培养液中的的死细胞?
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gigiloveu

铜虫 (小有名气)

自己顶一个
2楼2011-12-05 09:32:44
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bigbangrex

铁杆木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
我们都是冰上裂解30分钟的啊,效果不错。
3楼2011-12-05 09:50:42
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
lstt09nk(金币+2): 鼓励交流 2011-12-06 12:22:28
ripa  加pmsf  
冰上裂解小于1h   每15min混匀一次

检测凋亡相关的要把所有细胞都收集了
4楼2011-12-05 09:52:37
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gigiloveu

铜虫 (小有名气)

爽,我一直在怀疑冰上裂解5分钟时间有点短,所以导致最终提出的蛋白量有点低。谢谢各位大侠。
5楼2011-12-05 11:11:39
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xhjggl

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
1楼: Originally posted by gigiloveu at 2011-12-04 23:25:07:
提取细胞总蛋白,每毫升RIPA中加2微升的PMSF,冰上裂解5分钟,然后12000转低温离心30分钟。
这种方法提取出来的蛋白含量很低。
请问,是不是裂解时间太短了?
还有,我们是检测细胞凋亡的有关蛋白,请问收集加 ...

可以使用全蛋白提取试剂盒 BSP005阿,效率挺高的
6楼2011-12-05 22:51:29
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pershing123

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我是冰上裂解30min,每5min混匀一次
7楼2013-10-05 18:23:50
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DAX1

新虫 (小有名气)

不知道你的RIPA是否含有SDS,如果有SDS的话会有点粘稠,基本可以将全部细胞刮下来,然后超声下就可以。基本不会损失蛋白。
8楼2013-10-05 18:57:58
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