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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » western blot 细胞裂解时间
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gigiloveu

铜虫 (小有名气)

[交流] western blot 细胞裂解时间 已有5人参与

提取细胞总蛋白，每毫升RIPA中加2微升的PMSF，冰上裂解5分钟，然后12000转低温离心30分钟。
这种方法提取出来的蛋白含量很低。
请问，是不是裂解时间太短了？
还有，我们是检测细胞凋亡的有关蛋白，请问收集加药组细胞（贴壁）的时候，是否需要收集培养液中的的死细胞？
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1楼 2011-12-04 23:25:07
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gigiloveu

铜虫 (小有名气)
自己顶一个
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2楼2011-12-05 09:32:44
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bigbangrex

铁杆木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
我们都是冰上裂解30分钟的啊，效果不错。
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3楼2011-12-05 09:50:42
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
lstt09nk(金币+2): 鼓励交流 2011-12-06 12:22:28
ripa  加pmsf  
冰上裂解小于1h   每15min混匀一次

检测凋亡相关的要把所有细胞都收集了
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4楼2011-12-05 09:52:37
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gigiloveu

铜虫 (小有名气)
爽，我一直在怀疑冰上裂解5分钟时间有点短，所以导致最终提出的蛋白量有点低。谢谢各位大侠。
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5楼2011-12-05 11:11:39
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xhjggl

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
1楼: Originally posted by gigiloveu at 2011-12-04 23:25:07:
提取细胞总蛋白，每毫升RIPA中加2微升的PMSF，冰上裂解5分钟，然后12000转低温离心30分钟。
这种方法提取出来的蛋白含量很低。
请问，是不是裂解时间太短了？
还有，我们是检测细胞凋亡的有关蛋白，请问收集加 ...

可以使用全蛋白提取试剂盒 BSP005阿，效率挺高的
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6楼2011-12-05 22:51:29
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pershing123

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我是冰上裂解30min，每5min混匀一次
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7楼2013-10-05 18:23:50
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DAX1

新虫 (小有名气)
不知道你的RIPA是否含有SDS，如果有SDS的话会有点粘稠，基本可以将全部细胞刮下来，然后超声下就可以。基本不会损失蛋白。
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8楼2013-10-05 18:57:58
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