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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教：反转录反应的试剂问题？
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

[求助] 请教：反转录反应的试剂问题？

请教各位大侠：做反转录的时候，各种成分可以单独使用吗？比如 我想用 Promega的M-MLV酶 ， TaKARa的随机引物，还有dNTP，Biouniquer（国产）公司的RNA酶抑制剂 ，这样子组合不知道可以不可以？ 这样子的话，我觉得便宜一些。由于没这样做过，请教一下大家，谢谢解答！
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1楼 2012-12-06 13:09:48
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gyesang

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以的啊，我们实验室就是这样做的，都是单买的，是没有问题的，放心的去做吧
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2楼2012-12-06 13:45:17
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czcpudai

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2012-12-06 13:45:17
可以的啊，我们实验室就是这样做的，都是单买的，是没有问题的，放心的去做吧

，好的，终于有回答的了，非常感谢！！！
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3楼2012-12-06 16:17:28
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czcpudai

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2012-12-06 13:45:17
可以的啊，我们实验室就是这样做的，都是单买的，是没有问题的，放心的去做吧

您好，还有一个问题请教一下版主。我做的是药物对抗氧化基因SOD的表达影响，我分为正常组，模型组，低，中，高剂量组，共5组，每组做三个平行。当我做RT成功后，开始PCR检测SOD的时候，每个平行组的PCR也要做3次吗？还是每个平行组只做一次，然后3个平行组最后取平均值就行了？谢谢解答！！！
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4楼2013-01-06 10:43:24
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xj8442cn

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可以，不过反应缓冲液尽量用原装的，虽然都能进行，但是一般酶都是重组的，反应效率会不同
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5楼2013-01-06 13:08:03
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czcpudai

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by xj8442cn at 2013-01-06 13:08:03
可以，不过反应缓冲液尽量用原装的，虽然都能进行，但是一般酶都是重组的，反应效率会不同

buffer都是与逆转录酶相配的，也就是买的酶中带有相应的buffer。
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6楼2013-01-06 14:32:05
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gyesang

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【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 辛苦了 2013-01-07 16:31:20
引用回帖:
4楼: Originally posted by czcpudai at 2013-01-06 10:43:24
您好，还有一个问题请教一下版主。我做的是药物对抗氧化基因SOD的表达影响，我分为正常组，模型组，低，中，高剂量组，共5组，每组做三个平行。当我做RT成功后，开始PCR检测SOD的时候，每个平行组的PCR也要做3次吗 ...

5个处理
     重复    正常组，  模型组，  低，  中，   高剂量组
    1
      2
      3
我个人觉得，还是每个平行组要做3次，然后实际上是每个处理组9个Ct值取平均值（做的好的话是9个Ct值都能用，做的不好，比如1，可能当中有个Ct值与另外两个差很大，要剔除）
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
7楼2013-01-07 12:52:24
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