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czcpudai

铜虫 (正式写手)

[求助] 请教:反转录反应的试剂问题?

请教各位大侠:做反转录的时候,各种成分可以单独使用吗?比如 我想用 Promega的M-MLV酶 , TaKARa的随机引物,还有dNTP,Biouniquer(国产)公司的RNA酶抑制剂 ,这样子组合不知道可以不可以? 这样子的话,我觉得便宜一些。由于没这样做过,请教一下大家,谢谢解答!
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gyesang

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【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以的啊,我们实验室就是这样做的,都是单买的,是没有问题的,放心的去做吧
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2012-12-06 13:45:17
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2012-12-06 13:45:17
可以的啊,我们实验室就是这样做的,都是单买的,是没有问题的,放心的去做吧

,好的,终于有回答的了,非常感谢!!!
3楼2012-12-06 16:17:28
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2012-12-06 13:45:17
可以的啊,我们实验室就是这样做的,都是单买的,是没有问题的,放心的去做吧

您好,还有一个问题请教一下版主。我做的是药物对抗氧化基因SOD的表达影响,我分为正常组,模型组,低,中,高剂量组,共5组,每组做三个平行。当我做RT成功后,开始PCR检测SOD的时候,每个平行组的PCR也要做3次吗?还是每个平行组只做一次,然后3个平行组最后取平均值就行了?谢谢解答!!!
4楼2013-01-06 10:43:24
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xj8442cn

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可以,不过反应缓冲液尽量用原装的,虽然都能进行,但是一般酶都是重组的,反应效率会不同
5楼2013-01-06 13:08:03
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by xj8442cn at 2013-01-06 13:08:03
可以,不过反应缓冲液尽量用原装的,虽然都能进行,但是一般酶都是重组的,反应效率会不同

buffer都是与逆转录酶相配的,也就是买的酶中带有相应的buffer。
6楼2013-01-06 14:32:05
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gyesang

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【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 辛苦了 2013-01-07 16:31:20
引用回帖:
4楼: Originally posted by czcpudai at 2013-01-06 10:43:24
您好,还有一个问题请教一下版主。我做的是药物对抗氧化基因SOD的表达影响,我分为正常组,模型组,低,中,高剂量组,共5组,每组做三个平行。当我做RT成功后,开始PCR检测SOD的时候,每个平行组的PCR也要做3次吗 ...

5个处理
     重复    正常组,  模型组,  低,  中,   高剂量组
    1
      2
      3
我个人觉得,还是每个平行组要做3次,然后实际上是每个处理组9个Ct值取平均值(做的好的话是9个Ct值都能用,做的不好,比如1,可能当中有个Ct值与另外两个差很大,要剔除)
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
7楼2013-01-07 12:52:24
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