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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大家都是用什么方法提细菌基因组呢（文库用）
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bupashibai

银虫 (小有名气)

[交流] 大家都是用什么方法提细菌基因组呢（文库用）

构建基因文库用的，最好具体点。。。
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1楼 2012-11-24 21:37:34
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hraikeyan

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
bupashibai(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-28 13:35:21
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7楼: Originally posted by jl860822 at 2012-11-26 08:57:49
需要的片段是多大的，如果需要40kb左右的片段的话，建议你自己提取，如果你需要20kb以上的虎，试剂盒就可以的

我现在试了酚氯仿提取的方法，先用溶菌酶处理，离心后，上清加异丙醇沉淀，然后沉淀再用酚氯仿抽提，最后用乙醇洗涤。可是在异丙醇沉淀那一步怎么也没有丝状物出现，是什么原因啊？都提了好多次了，开始怀疑是菌量问题，可是不管怎么调整都是这个结果。
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8楼2012-11-26 09:30:28
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普通回帖

qhuzhl

金虫 (小有名气)
★
bupashibai(金币+1): 谢谢参与
试剂盒，如宝生物等品牌都有
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2楼2012-11-25 12:20:03
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wsh01300

铜虫 (小有名气)
★
bupashibai(金币+1): 谢谢参与
看文库大小，柱式DNA提取试剂盒提取的基因组DNA大小在15kb以上，要更大的基因基DNA的话要用溶液型的试剂盒。
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3楼2012-11-25 14:23:15
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德国工兵铲

金虫 (小有名气)
★
bupashibai(金币+1): 谢谢参与
试剂盒，现在很多公司都有  细菌基因组提取试剂盒，你可以针对你要提的东西咨询生物公司，他们会推荐合适的产品

[ Last edited by 德国工兵铲 on 2012-11-25 at 17:47 ]
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4楼2012-11-25 17:45:32
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孤星残月

铁虫 (小有名气)
★
bupashibai(金币+1): 谢谢参与
用溶菌酶裂解细胞，后酚氯仿提取吧
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5楼2012-11-25 22:59:15
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Myrainy1020

银虫 (小有名气)
★
bupashibai(金币+1): 谢谢参与
感觉传统的酚氯仿提取还是比较好的，不用特殊仪器，又便宜，只要细心点，提取的质量还是比较好的。
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6楼2012-11-25 23:14:25
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jl860822

金虫 (正式写手)
★ ★
bupashibai(金币+1): 谢谢参与
bupashibai: 金币+1, 专业 2012-11-26 16:24:43
需要的片段是多大的，如果需要40kb左右的片段的话，建议你自己提取，如果你需要20kb以上的虎，试剂盒就可以的
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7楼2012-11-26 08:57:49
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jl860822

金虫 (正式写手)
那你跑胶鉴定结果呢？有没有条带？有些时候是看不清楚的，或者说你的菌量少了点
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9楼2012-11-26 10:23:55
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yongbo_liang

新虫 (小有名气)
★
bupashibai(金币+1): 谢谢参与
我们使用磁球提取DNA，方便，快，没有有机试剂，提取效果和得率也可以。
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10楼2012-11-26 11:36:01
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bupashibai

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wsh01300 at 2012-11-25 14:23:15
看文库大小，柱式DNA提取试剂盒提取的基因组DNA大小在15kb以上，要更大的基因基DNA的话要用溶液型的试剂盒。

可以推荐款试剂盒么，我用那种普通的生工的试剂盒貌似不可以。。。。
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12楼2012-11-26 16:35:30
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bupashibai

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by Myrainy1020 at 2012-11-25 23:14:25
感觉传统的酚氯仿提取还是比较好的，不用特殊仪器，又便宜，只要细心点，提取的质量还是比较好的。

恩，先试试。。。
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13楼2012-11-26 16:35:56
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bupashibai

银虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by yongbo_liang at 2012-11-26 11:36:01
我们使用磁球提取DNA，方便，快，没有有机试剂，提取效果和得率也可以。

提个DNA我们小硕怎么好意思买那种试剂盒。。。
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14楼2012-11-26 16:38:05
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weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)
★
bupashibai(金币+1): 谢谢参与
我们的方法比较暴力，是液氮磨一下，TE溶出来，酚抽醇沉
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15楼2012-11-26 17:30:39
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zhengli123

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
先用酚氯仿抽提试试，不行就买试剂盒
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16楼2012-11-27 08:59:53
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hu6704526

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
提取过程中不一定都有絮状沉淀出现的，按照既定的步骤往下操作就可以。
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17楼2012-11-27 12:30:29
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yongbo_liang

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
14楼: Originally posted by bupashibai at 2012-11-26 16:38:05
提个DNA我们小硕怎么好意思买那种试剂盒。。。...

那也没什么啊，价格也不贵，而且方便好用。
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18楼2012-11-27 14:00:46
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happy!?

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
感觉提取的条件也会有影响的吧！
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19楼2012-11-27 14:43:39
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fddyn

金虫 (小有名气)
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8楼: Originally posted by hraikeyan at 2012-11-26 09:30:28
我现在试了酚氯仿提取的方法，先用溶菌酶处理，离心后，上清加异丙醇沉淀，然后沉淀再用酚氯仿抽提，最后用乙醇洗涤。可是在异丙醇沉淀那一步怎么也没有丝状物出现，是什么原因啊？都提了好多次了，开始怀疑是菌量 ...

加异丙醇醇沉不一定会出现丝状物，你可以醇沉一个小时后离心，离心后在管底壁上能看到dna沉淀
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20楼2012-11-27 21:15:33
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hraikeyan

金虫 (小有名气)
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9楼: Originally posted by jl860822 at 2012-11-26 10:23:55
那你跑胶鉴定结果呢？有没有条带？有些时候是看不清楚的，或者说你的菌量少了点

用于筛选基因文库所用的96孔板有什么要求吗？需要多大的体积？尖底还是平底？
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21楼2012-12-20 18:48:41
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jl860822

金虫 (正式写手)
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21楼: Originally posted by hraikeyan at 2012-12-20 18:48:41
用于筛选基因文库所用的96孔板有什么要求吗？需要多大的体积？尖底还是平底？...

我以前买的是Corning的
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22楼2012-12-20 20:55:35
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hraikeyan

金虫 (小有名气)
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22楼: Originally posted by jl860822 at 2012-12-20 20:55:35
我以前买的是Corning的...

这个贵吗？我在网上查了一下一个大概是16元。有这么贵吗？
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23楼2012-12-21 09:15:17
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hp800953

银虫 (小有名气)
mobio 试剂盒
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24楼2012-12-21 12:30:55
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jl860822

金虫 (正式写手)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
23楼: Originally posted by hraikeyan at 2012-12-21 09:15:17
这个贵吗？我在网上查了一下一个大概是16元。有这么贵吗？...

你可以买国产，只要1/3的价格
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25楼2012-12-21 15:23:05
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文库构建

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
提DNA用于构建文库，必须要提出高质量的DNA。这样插入片段100kb左右
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26楼2013-10-14 09:01:42
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liqing4214

新虫 (初入文坛)
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8楼: Originally posted by hraikeyan at 2012-11-26 09:30:28
我现在试了酚氯仿提取的方法，先用溶菌酶处理，离心后，上清加异丙醇沉淀，然后沉淀再用酚氯仿抽提，最后用乙醇洗涤。可是在异丙醇沉淀那一步怎么也没有丝状物出现，是什么原因啊？都提了好多次了，开始怀疑是菌量 ...

我也觉得是菌量，也就是DNA浓度没上去，多重复试试
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27楼2013-10-14 15:01:15
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bupashibai11楼
2012-11-26 16:34   回复  
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2楼: Originally posted by qhuzhl at 2012-11-25 12:20:03 试剂盒，如宝生物等品牌都有

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