应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » western blot 半干式电转转不上问题！！快来帮帮忙啊！！
141/2返回列表12下一页
查看: 1910  |  回复: 13
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

wxz1017

金虫 (小有名气)

[求助] western blot 半干式电转转不上问题！！快来帮帮忙啊！！

最近做western blot 目的蛋白大概30kD左右，用半干式电转，仪器都是伯乐的，电压15v，转1h，转了好几次都没转上，转的时候刚开始电流30mA，过几分钟就成20多了，功率刚开始是1，后来是0，感觉电流太小了，高手快来帮帮个忙啊！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2012-11-20 16:53:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
半干转移可以用稳压，也可以用稳流。我通常是做稳流。所需电流（mA）=胶的面积（平方厘米）。一般开始的时候电压为6-7v，一个小时后电压是12-15V。半干转移的功率比湿法要小很多，虽然不知道你的胶是多大的，但我觉得你说的数据不是很离谱。为什么转不上去可能有其它原因。你的marker是不是转上去了呢？
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

wxz1017
2楼2012-11-21 07:28:32
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
Marker有没有转上去？是不是机器出问题了？或者短路啥的
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2012-11-21 09:07:36
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

子曰包子好吃

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主可以试下湿转，我们这边20多KD的 100V 50分钟就很好了
赞一下 回复此楼
3楼2012-11-21 08:12:29
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wxz1017

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-21 07:28:32
半干转移可以用稳压，也可以用稳流。我通常是做稳流。所需电流（mA）=胶的面积（平方厘米）。一般开始的时候电压为6-7v，一个小时后电压是12-15V。半干转移的功率比湿法要小很多，虽然不知道你的胶是多大的，但我觉 ...

就是因为maker都没转上所以才这么着急！我用的胶板是下层12%5ml，加样时前五个后五个重复一模一样，用的预染maker，转的时候胶面积是下层胶的一半，按说电流也正常啊！怎么就转不上呢？
赞一下 回复此楼
5楼2012-11-21 12:29:22
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by wxz1017 at 2012-11-21 12:29:22
就是因为maker都没转上所以才这么着急！我用的胶板是下层12%5ml，加样时前五个后五个重复一模一样，用的预染maker，转的时候胶面积是下层胶的一半，按说电流也正常啊！怎么就转不上呢？...

预染的marker都没有的确是有问题，转移缓冲液没有问题吗？会不会是三明治放反了？
赞一下 回复此楼
6楼2012-11-21 15:13:18
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wxz1017

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-21 15:13:18
预染的marker都没有的确是有问题，转移缓冲液没有问题吗？会不会是三明治放反了？...

缓冲液是新配的，三明治结构胶在上膜在下这些应该没问题.
赞一下 回复此楼
7楼2012-11-21 15:22:31
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by wxz1017 at 2012-11-21 15:22:31
缓冲液是新配的，三明治结构胶在上膜在下这些应该没问题....

你做的三明治是不是滤纸、胶、膜都是一样大？与湿法不同的是，如果滤纸太大有时候转移效果差。
赞一下 回复此楼
8楼2012-11-21 15:31:52
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wxz1017

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-21 15:31:52
你做的三明治是不是滤纸、胶、膜都是一样大？与湿法不同的是，如果滤纸太大有时候转移效果差。...

是都一样大，滤纸还要稍微大点，我再把滤纸减小点试试吧！
赞一下 回复此楼
9楼2012-11-22 11:15:05
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunshinewzy

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我有个同学遇到过跟你相同的问题，他最后解决的办法是把三明治结构弄紧了一些，可以多加一点滤纸，可能是三明治结构太松散蛋白转到buffer里面去了。我用湿法转膜，有一次专用的转膜滤纸没有了，自己剪的滤纸，夹的很紧也没有问题的~
赞一下 回复此楼
10楼2012-11-22 12:21:10
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wxz1017 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭