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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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wxz1017

金虫 (小有名气)

[求助] western blot 半干式电转转不上问题!!快来帮帮忙啊!!

最近做western blot 目的蛋白大概30kD左右,用半干式电转,仪器都是伯乐的,电压15v,转1h,转了好几次都没转上,转的时候刚开始电流30mA,过几分钟就成20多了,功率刚开始是1,后来是0,感觉电流太小了,高手快来帮帮个忙啊!!
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by wxz1017 at 2012-11-21 12:29:22
就是因为maker都没转上所以才这么着急!我用的胶板是下层12%5ml,加样时前五个后五个重复一模一样,用的预染maker,转的时候胶面积是下层胶的一半,按说电流也正常啊!怎么就转不上呢?...

预染的marker都没有的确是有问题,转移缓冲液没有问题吗?会不会是三明治放反了?
6楼2012-11-21 15:13:18
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查看全部 14 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
半干转移可以用稳压,也可以用稳流。我通常是做稳流。所需电流(mA)=胶的面积(平方厘米)。一般开始的时候电压为6-7v,一个小时后电压是12-15V。半干转移的功率比湿法要小很多,虽然不知道你的胶是多大的,但我觉得你说的数据不是很离谱。为什么转不上去可能有其它原因。你的marker是不是转上去了呢?

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2楼2012-11-21 07:28:32
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子曰包子好吃

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主可以试下湿转,我们这边20多KD的 100V 50分钟就很好了
3楼2012-11-21 08:12:29
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jl860822

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
Marker有没有转上去?是不是机器出问题了?或者短路啥的
4楼2012-11-21 09:07:36
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