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wxz1017

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[求助] western blot 半干式电转转不上问题！！快来帮帮忙啊！！

最近做western blot 目的蛋白大概30kD左右，用半干式电转，仪器都是伯乐的，电压15v，转1h，转了好几次都没转上，转的时候刚开始电流30mA，过几分钟就成20多了，功率刚开始是1，后来是0，感觉电流太小了，高手快来帮帮个忙啊！！

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1楼 2012-11-20 16:53:41

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wxz1017

金虫 (小有名气)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-21 07:28:32
半干转移可以用稳压，也可以用稳流。我通常是做稳流。所需电流（mA）=胶的面积（平方厘米）。一般开始的时候电压为6-7v，一个小时后电压是12-15V。半干转移的功率比湿法要小很多，虽然不知道你的胶是多大的，但我觉 ...

就是因为maker都没转上所以才这么着急！我用的胶板是下层12%5ml，加样时前五个后五个重复一模一样，用的预染maker，转的时候胶面积是下层胶的一半，按说电流也正常啊！怎么就转不上呢？

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5楼2012-11-21 12:29:22

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cicelyzh

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【答案】应助回帖

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半干转移可以用稳压，也可以用稳流。我通常是做稳流。所需电流（mA）=胶的面积（平方厘米）。一般开始的时候电压为6-7v，一个小时后电压是12-15V。半干转移的功率比湿法要小很多，虽然不知道你的胶是多大的，但我觉得你说的数据不是很离谱。为什么转不上去可能有其它原因。你的marker是不是转上去了呢？

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