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wxz1017

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[求助] western blot 半干式电转转不上问题！！快来帮帮忙啊！！

最近做western blot 目的蛋白大概30kD左右，用半干式电转，仪器都是伯乐的，电压15v，转1h，转了好几次都没转上，转的时候刚开始电流30mA，过几分钟就成20多了，功率刚开始是1，后来是0，感觉电流太小了，高手快来帮帮个忙啊！！

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1楼2012-11-20 16:53:41

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wxz1017

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引用回帖:

6楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-21 15:13:18
预染的marker都没有的确是有问题，转移缓冲液没有问题吗？会不会是三明治放反了？...

缓冲液是新配的，三明治结构胶在上膜在下这些应该没问题.

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7楼2012-11-21 15:22:31

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cicelyzh

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【答案】应助回帖

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半干转移可以用稳压，也可以用稳流。我通常是做稳流。所需电流（mA）=胶的面积（平方厘米）。一般开始的时候电压为6-7v，一个小时后电压是12-15V。半干转移的功率比湿法要小很多，虽然不知道你的胶是多大的，但我觉得你说的数据不是很离谱。为什么转不上去可能有其它原因。你的marker是不是转上去了呢？

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