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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 各位帮忙指点一下，我为什么没跑出我的目的条带
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叶鑫

新虫 (初入文坛)

[交流] 各位帮忙指点一下，我为什么没跑出我的目的条带

各位好~！我是一个新手！最近提RNA，OD值都在1.8~2.0之间，我反转录，PCR跑胶，结果都不行，跑出的胶都是这样的！！我跑了7个目的基因都这样，我提的是水霉菌丝的RNA，我不知道是不是我从提RNA就有问题了，谢谢！希望各位为我解答，[ Last edited by 1949stone on 2012-11-16 at 07:34 ]
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    • 2012-11-15 20:42:36, 1.25 M

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1楼 2012-11-15 20:44:03
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德国工兵铲

金虫 (小有名气)
★
叶鑫(金币+1): 谢谢参与
RNA不太好提取，容易降解，所以RNA提取之后一定要跑胶，看看是不是3条或者两条带，带是不是清晰，以及28S条带亮度是不是18S条带亮度的2倍。
RNA不检测怎么可以直接就用了啊？！
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2楼2012-11-15 22:37:49
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yyll1988

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
从提RNA 反转 到PCR  提RNA也需要检测的啊， 你可以找一对已经确定可以调出基因的引物做阳性对照试试啊，用的多大的marker啊 确定最都是引物二聚体吗？
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3楼2012-11-15 22:48:50
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gdj363702043

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不知道楼主要的目的条带是多少BP我看你图片上有的已经有亮带了  如果这不是你的目的查无那就是说明发生非特异性扩增了   重新设计引物应该能解决
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4楼2012-11-21 09:40:23
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jl860822

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
RNA不检测就直接扩增是不行的
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5楼2012-11-21 12:16:38
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