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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 配制PCR反应体系在碎冰上好，还是经-80℃冰冻过的冰上好呢？
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轻清1106

铜虫 (小有名气)

[交流] 配制PCR反应体系在碎冰上好，还是经-80℃冰冻过的冰上好呢？ 已有38人参与

近期将碎冰于前天放至-80℃冰箱，第二天取出用，省去等制冰机制冰的时间。在这个冰上配制PCR反应体系，有些药品会凝固。稀释的DNA最多用3-4天就会慢慢降解，P出来的结果越来越不理想。这是因为-80℃冰导致的么？各位有经验的都出来交流交流咯。。。
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1楼 2012-11-05 10:44:30
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zhanggz

银虫 (正式写手)
★ ★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-05 20:11:06
一般的PCR反应，像现在的天气用不用冰都没有关系。Taq酶提取时需要在4度冰箱里透析了两天。不过在冰上心里感觉会好些，PCR体系不稳定还是从其他方面找原因，应该不是酶的问题。用-80的冰有点夸张了！
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6楼2012-11-05 11:45:12
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ybQuan

金虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
告诉你大神怎么做：全程不用冰，效果照样很犀利。
关键不在用不用冰
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哥在江湖漂，很少不挨刀，不是愿意挨，是哥很无奈!
13楼2012-11-05 17:32:26
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huanshi

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
随便做，习惯室温做，大夏天也是，关键引物要设计好！
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16楼2012-11-05 18:34:24
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huanancy2012

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
用普通的碎冰即可，在加taq酶时尤其要注意，因为taq酶要避免反复冻融，平常taq酶是保存在-20度的，在取完酶后要及时将taq酶放回冰箱-20度层，同时加taq酶后的反应体系应在冰上，这样可以保证在pcr反应中过早出现非特异性的模板，造成在后续实验中出现非特异带。
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淡定人生！
21楼2012-11-06 00:43:20
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普通回帖

静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)
★
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碎冰的好吧，其实没关系的啊
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让复杂的事情变简单，简单的事情更简单
2楼2012-11-05 10:46:57
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
新鲜制的冰就可以了
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jiayoubashaonian
3楼2012-11-05 11:20:01
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阿留申

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-05 20:10:38
加酶之前放不放冰上都无所谓，加酶之后最好放在冰上，因为加了Taq酶（该酶在很大温度范围内都是有活性的），体系就会反应，可能会对我们扩增的片段有一定的影响。但是如果做得样比较少时，这些没太大影响，如果做得样多，不放冰上可能影响比较大！希望对你能有些帮助
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4楼2012-11-05 11:24:54
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86964109

木虫 (小有名气)
★ ★
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小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-11-05 20:10:51
-80 冻过的冰上放置试剂一般都会冻结的，尽量不要用，反正酶是不能冻存在-80的，容易变构失活，从-80刚拿出的冰基本上也是那种温度，一定要放冰上的话，还是用新鲜的碎冰或冻存在-20吧
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5楼2012-11-05 11:41:21
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blackeye67

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
细致点的都在冰盒上加，最后加酶一定要放在冰上，粗糙点的话除了酶之外都可以再室温配，最后加酶在冰上加。不用-80冰的，一般就可以了。
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7楼2012-11-05 14:17:42
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riyuewangxiaoke

木虫 (著名写手)
★
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普通的冰块 碎了就行吧
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当时明月在曾照彩云归
8楼2012-11-05 16:01:04
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lwllhb

至尊木虫 (著名写手)
其实没关系的啊
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9楼2012-11-05 16:18:38
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geyuyang2010

铁虫 (小有名气)
★
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-20度即可，只是防止防止加样时发生酶促反应，温度到达一定程度即可
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10楼2012-11-05 16:36:14
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