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huanancy2012

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
用普通的碎冰即可,在加taq酶时尤其要注意,因为taq酶要避免反复冻融,平常taq酶是保存在-20度的,在取完酶后要及时将taq酶放回冰箱-20度层,同时加taq酶后的反应体系应在冰上,这样可以保证在pcr反应中过早出现非特异性的模板,造成在后续实验中出现非特异带。
淡定人生!
21楼2012-11-06 00:43:20
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juzilesley

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
碎冰上即可,温度不是越低越好,酶类的东西最怕的就是反复冻融啦! *^o^*

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
22楼2012-11-06 07:31:32
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shs304

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
做实验是时候再碎冰上好。
-80℃会导致反复冻融,而且会很剧烈的温差。
23楼2012-11-06 08:22:47
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tjwade

铁杆木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
最近跑胶经常有二聚体。。
努力刻苦
24楼2012-11-06 09:15:47
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轻清1106

铜虫 (小有名气)


引用回帖:
5楼: Originally posted by 86964109 at 2012-11-05 11:41:21
-80 冻过的冰上放置试剂一般都会冻结的,尽量不要用,反正酶是不能冻存在-80的,容易变构失活,从-80刚拿出的冰基本上也是那种温度,一定要放冰上的话,还是用新鲜的碎冰或冻存在-20吧

是的,发现酶一会冻结。
25楼2012-11-06 09:49:58
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轻清1106

铜虫 (小有名气)


引用回帖:
4楼: Originally posted by 阿留申 at 2012-11-05 11:24:54
加酶之前放不放冰上都无所谓,加酶之后最好放在冰上,因为加了Taq酶(该酶在很大温度范围内都是有活性的),体系就会反应,可能会对我们扩增的片段有一定的影响。但是如果做得样比较少时,这些没太大影响,如果做得 ...

嗯,谢谢!我做的样都比较多。所以一般在冰上操作。
26楼2012-11-06 09:50:49
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轻清1106

铜虫 (小有名气)


引用回帖:
6楼: Originally posted by zhanggz at 2012-11-05 11:45:12
一般的PCR反应,像现在的天气用不用冰都没有关系。Taq酶提取时需要在4度冰箱里透析了两天。不过在冰上心里感觉会好些,PCR体系不稳定还是从其他方面找原因,应该不是酶的问题。用-80的冰有点夸张了!

嗯嗯。是有点夸张。。
27楼2012-11-06 09:51:44
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轻清1106

铜虫 (小有名气)


引用回帖:
7楼: Originally posted by blackeye67 at 2012-11-05 14:17:42
细致点的都在冰盒上加,最后加酶一定要放在冰上,粗糙点的话除了酶之外都可以再室温配,最后加酶在冰上加。不用-80冰的,一般就可以了。

嗯,好的,谢谢!
28楼2012-11-06 09:52:30
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轻清1106

铜虫 (小有名气)


引用回帖:
13楼: Originally posted by ybQuan at 2012-11-05 17:32:26
告诉你大神怎么做:全程不用冰,效果照样很犀利。
关键不在用不用冰

这么强悍。。
29楼2012-11-06 09:53:57
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轻清1106

铜虫 (小有名气)


引用回帖:
11楼: Originally posted by 竹子小小 at 2012-11-05 16:37:12
不要-80啊,也不用碎冰。你们实验室可以用冰盒啊。上面是密封的EP管架,下面是冰。DNA不能用不是冰的问题。是你保存的问题。即使我们室温操作问题也不大的,你想PCR是多少度?每次PCR都1-2小时,你还担心PCR体系撑不 ...

DNA稀释之后,我是存放在4度冰箱的啊。。按理来说不应该有问题的呀。结果就是三四天体系就有问题了。重新稀释就会好,也怀疑过是污染的问题,但是自己操作没发现有什么问题。体系优化的时候(碎冰),DNA也是用了半个多月也没出现什么异常问题。这下子就以为会不会是用冰的问题。
30楼2012-11-06 10:00:30
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