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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 配制PCR反应体系在碎冰上好，还是经-80℃冰冻过的冰上好呢？
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轻清1106

铜虫 (小有名气)

[交流] 配制PCR反应体系在碎冰上好，还是经-80℃冰冻过的冰上好呢？ 已有38人参与

近期将碎冰于前天放至-80℃冰箱，第二天取出用，省去等制冰机制冰的时间。在这个冰上配制PCR反应体系，有些药品会凝固。稀释的DNA最多用3-4天就会慢慢降解，P出来的结果越来越不理想。这是因为-80℃冰导致的么？各位有经验的都出来交流交流咯。。。
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1楼 2012-11-05 10:44:30
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huanancy2012

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
用普通的碎冰即可，在加taq酶时尤其要注意，因为taq酶要避免反复冻融，平常taq酶是保存在-20度的，在取完酶后要及时将taq酶放回冰箱-20度层，同时加taq酶后的反应体系应在冰上，这样可以保证在pcr反应中过早出现非特异性的模板，造成在后续实验中出现非特异带。
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淡定人生！
21楼2012-11-06 00:43:20
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静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
碎冰的好吧，其实没关系的啊
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让复杂的事情变简单，简单的事情更简单
2楼2012-11-05 10:46:57
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
新鲜制的冰就可以了
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jiayoubashaonian
3楼2012-11-05 11:20:01
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阿留申

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-05 20:10:38
加酶之前放不放冰上都无所谓，加酶之后最好放在冰上，因为加了Taq酶（该酶在很大温度范围内都是有活性的），体系就会反应，可能会对我们扩增的片段有一定的影响。但是如果做得样比较少时，这些没太大影响，如果做得样多，不放冰上可能影响比较大！希望对你能有些帮助
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4楼2012-11-05 11:24:54
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